清热康口服液的薄层色谱鉴别研究

连瑞丽 ， 李宇伟 ， 马 霞 ， 张国祖，2 ， 刘永录

(1.河南牧业经济学院药物工程系 ， 河南郑州450046 ； 2.河南省康星药业股份有限公司 ， 河南郑州451464)

清热康口服液的薄层色谱鉴别研究

连瑞丽1， 李宇伟1， 马 霞1， 张国祖1，2， 刘永录1

(1.河南牧业经济学院药物工程系 ， 河南郑州450046 ； 2.河南省康星药业股份有限公司 ， 河南郑州451464)

为了建立清热康口服液的薄层色谱鉴别的方法，给制定其质量控制标准提供依据。用薄层色谱法对清热康口服液处方中的穿心莲、板蓝根和大青叶进行定性鉴别。结果在薄层色谱中均能检出穿心莲、板蓝根和大青叶药味的特征斑点。表明本法操作简便可靠、专属性强、灵敏度高，可作为清热康口服液的定性鉴别和质量控制的方法。

清热康口服液 ； 薄层色谱 ； 质量控制

清热康口服液是根据中兽医理论和临床辨证的原则，自拟组方选用穿心莲、板蓝根和大青叶三味中药材组成的中药复方制剂，具有清热解毒、泻火除烦、辛凉解表、消炎止痛之功效，对动物细菌性与病毒性呼吸道感染及肠道感染性疾病有特殊疗效。目前，该制剂尚缺乏相应的鉴别方法，本研究参考《中华人民共和国兽药典》(二部)和《中华人民共和国药典》(一部)[1-2]中穿心莲、板蓝根和大青叶三味中药材的薄层色谱鉴别方法，建立了清热康口服液质量控制的薄层色谱鉴别方法，可更好地控制该制剂的质量，为进一步建立蓝莲口服液的质量标准提供理论依据。

1 仪器与试药

1.1 主要仪器设备 薄层自动点样仪，薄层色谱扫描仪，上海科哲生化科技有限公司；UV230+型可变波长紫外检测器，大连依利特分析仪器有限公司；AUW220D1电子天平，日本岛津国际贸易有限公司；JCX-400GZ超声波清洗器，山东省济宁市超声电子仪器厂。所用的玻璃器皿等用具均经10%硝酸浸泡48 h后，用超纯水洗净。

1.2 主要试药与试剂 清热康口服液，由河南牧业经济学院“中兽药新制剂”科技创新团队与河南省康星药业股份有限公司兽药新制剂实验室联合研制(批号为：14070501、14070502)；(R，S)-告依春标准品(批号为：111753-201304)、穿心莲内酯标准品(批号为：110854-201313)、脱水穿心莲内酯标准品(批号为：110797-200307)、靛玉红标准品(批号为110717-200204)，均购自中国药品生物制品检定所。环己烷、三氯甲烷、丙酮、磷酸、甲醇、乙醇、石油醚、乙酸乙酯等试剂，均为分析纯；硅胶G 薄层板、硅胶GF254 薄层板，青岛海洋化工厂生产。

2 方法与结果

2.1 穿心莲的薄层色谱鉴别 取清热康口服液2 mL，加乙醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至5 mL，作为供试品溶液。另取穿心莲对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取脱水穿心莲内酯标准品、穿心莲内酯标准品，加无水乙醇制成每毫升各含1 mg的混合溶液，作为标准品溶液。按清热康口服液的生产工艺制备阴性样品(不含穿心莲)量取1.5 mL，按供试品制备方法制备成阴性对照药，材溶液。吸取上述4种溶液各10 μL，依次分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(4∶3∶0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为254 nm的紫外光灯下检视[1-4]。

如图1所示，在波长为254 nm的紫外光灯下检视，供试品中的穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯成分可与其他成分有效分离开，并与对照药材和穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯标准品相对应的位置上，显示出相同颜色的斑点。无穿心莲阴性样品在此种展开剂和显色方法中，未出现斑点。由此可以看出，此鉴别方法可以作为清热康口服液中穿心莲的薄层鉴别方法。

图1 穿心莲的薄层色谱图

注：1：穿心莲对照药材；2、3：清热康口服液(批号为：14070501、14070502)；4：穿心莲阴性；5：穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯

2.2 板蓝根的薄层色谱鉴别 取清热康口服液2 mL，加80%甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取板蓝根对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取(R，S)-告依春标准品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为标准品的溶液。按清热康口服液的生产工艺制备不含板蓝根的阴性样品，量取2 mL，按供试品制备方法制成阴性对照药材溶液[1-2，5，7]。吸取上述4种溶液各10 μL，依次点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60°C～90°C)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为254 nm的紫外光灯下检视。

如图2所示，在波长为254 nm的紫外光灯下检视，供试品中的(R，S)-告依春成分可与其他成分有效分离开，并与对照药材和(R，S)-告依春标准品相应的位置上，显示出相同颜色的斑点。无板蓝根阴性样品在此种展开剂和显色方法中，未出现斑点。由此可以看出，此鉴别方法可以作为清热康口服液中板蓝根的薄层鉴别方法。

图2 板蓝根的薄层色谱图

注：1：板蓝根阴性；2、3.清热康口服液(批号为：14070501、14070502)；4：R-S告依春；5：板蓝根对照药材

2.3 大青叶的薄层色谱鉴别 取清热康口服液2 mL，加三氯甲烷20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。另取靛玉红标准品加三氯甲烷制成每毫升含1 mg的溶液，作为标准品溶液。按清热康口服液的生产工艺制备不含大青叶的阴性样品，量取1.5 mL，按供试品制备方法制成阴性对照药材溶液[1-2，8-9]。吸取上述4种溶液各 10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶2)为展开剂，展开，取出，晾干。

如图3所示，白光下视检，供试品中的靛玉红成分可与其他成分有效分离开，并与标准品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。无大青叶阴性样品在此种展开剂和显色方法中，未出现斑点。由此可以看出，此鉴别方法可以作为清热康口服液中大青叶的薄层鉴别方法。

图3 大青叶的薄层色谱图

注：1：靛玉红；2、3：清热康口服液(批号为：14070501、14070502)；4：大青叶阴性

3 讨论

3.1 薄层色谱条件的优化 该鉴别方法是参考《中华人民共和国兽药典》(二部)和《中华人民共和国药典》(一部)[1-2]板蓝根、大青叶和穿心莲三味中药材的薄层色谱鉴别方法，并对采用的硅胶薄层板进行了筛选，穿心莲和板蓝根采用硅胶GF254薄层板，大青叶采用硅胶G薄层板；穿心莲以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(4∶3∶0.4)为展开剂，板蓝根以石油醚(60 ℃～90 ℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，大青叶以环己烷-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶2)为展开剂，能够获得理想的色谱效果。此外，药典规定单药的称样量是0.5 g，点样量均为5 μL，按照5 μL的点样量，经多次试验，发现样品和对照药材都很难展开，斑点分离度差。因清热康口服液为复方制剂，其含量为每毫升相当于0.5 g原药材，将药典中的方法折算成复方的称样量为2 mL，同时由于口服液样品中活性成分的含量较低，故将点样量由药典的5 μL增加为10 μL，所得色谱图的斑点清晰，分离良好。

3.2 清热康口服液的薄层色谱鉴别 本处方中药相互间干扰较大，本文在优化了薄层色谱条件后，对清热康口服液中的活性成分进行了薄层色谱鉴别研究，结果发现，这些活性成分均可与其他成分有效分离开，并分别与相应对照药材或标准品相同的位置上出现相同颜色并且清晰的斑点，而所有阴性样品在相应的展开剂和显色方法中，均未出现相应标准品斑点。结果表明，本研究所采用的薄层色谱方法，专属性强、重现性好、灵敏度高，用于清热康口服液中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、(R，S)-告依春、靛玉红成分的定性鉴别及质量控制是切实可行的。

[1] 中国药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：251-152.

[2] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二部[S].北京：中国农业出版社，2011：270-780.

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Study on Thin Layer Chromatography Identification of Qingrekang Oral Liquid

LIAN Rui-li1， LI Yu-wei1， MA Xia1， ZHANG Guo-zu1，2， LIU Yong-lu1

(1.Medicinal Engineering Department of Henan University of Animal Husbandry and Economy，Zhengzhou 450046，China ； 2.Henan KangXing pharmaceutical company limited，Zhengzhou 451464，China)

To establish a thin layer chromatography(TLC)identification method of Qingrekang oral liquid to provide quality control standard for the product.The TLC method was established for qualitative identification ofAndrographispaniculata、RadixIsatidisand leaves of Radix Isatidis in prescription of Qingrekang Oral Liquid.The character blotches ofAndrographispaniculata、RadixIsatidisand leaves of Radix Isatidis in prescription were detected by TLC.The TLC identification method is a simple，reliable and specific method with good reproducibility，which can be used as quality control identification method for Qingrekang Oral Liquid.

Qingrekang oral liquid ； Thin layer chromatography(TLC) ； Quality control

MA Xia

2015-08-12

河南牧业经济学院“中兽药新制剂创新”科技创新团队项目(HUAHE2015009)；河南省教育厅自然科学研究计划项目(2009B210025)

连瑞丽(1978-)，女，讲师，硕士，主要从事中兽药新制剂的研究工作，E-mail：lrl410@163.com

马霞，E-mail：maxia801010@126.com

R284

A

0529-6005(2016)11-0107-03