罗氏Cobas e602电化学发光分析仪分析性能验证

张兴宗，施雄飞，邹映东，张清文，林 云

(云南省中医医院检验科,云南昆明 650021)

根据ISO15189 CNAS-CL02:2012《医学实验室质量和能力认可准则》的规定，对开展新的检测项目，更换检测系统或改变检测试剂盒厂商时，实验室需对其相关方法学分析性能进行验证，对厂商提供的评价资料主要性能进行确认,并每年定期对仪器进行性能验证[1]。本文根据NCCLS(EP5-A2、EP15-A2、EP6-A2)文件及中华人民共和国卫生行业标准《WS/T 402-2012 临床实验室检验项目参考区间的制定》的相关文件[2-5]，对罗氏Cobas e602电化学发光分析仪进行性能验证，现报道如下。

1 材料与方法

1.1标本来源 血清样品来自于本院临床科室送达检验科的送检标本及健康体检中心体检标本。

1.2标本采集及保存 采集空腹静脉血3～5 mL于一次性真空干燥管中，室温放置30 min，以3 000 r/min离心5 min，分离血清后于2～8 ℃冷藏保存，5 d内完成各项指标的验证工作。

1.3仪器与试剂 仪器:罗氏Cobas e602电化学发光分析仪；试剂：罗氏公司糖类抗原19-9(CA19-9))批号 23161201、糖类抗原15-3(CA15-3)批号20990001、促绒毛膜性腺激素(hCG)批号24044401、促甲状腺激素(TSH)批号24169301，同时期罗氏配套校准品及质控品。

1.4方法 依据NCCLS各项文件，对罗氏Cobas e602电化学发光分析仪精密度、正确度、线性范围、参考区间指标进行性能验证。

1.4.1精密度验证 依据NCCLS EP5-A2对精密度进行验证。选取2个浓度水平接近试剂说明书所声明浓度相似的样本(日常检测样本血清)，连续检测5 d，每日2个浓度水平分析1批，每一水平同一样本做4次重复测定且于2 h内完成。计算批内(重复性)不精密度和总(中间/室内)不精密度。批内不精密度：<1/4生产厂商试剂说明书中声明的不精密度。总不精密度(中间/室内)：<1/3生产厂商试剂说明书中声明的不精密度为验证通过。

1.4.2正确度验证 依据NCCLS EP15-A2及卫生部EQA室间质评计划质评结果回执。以最近2次参加卫生部临床检验中心EQA室间质评回报的10个检测结果数据为依据，对回馈的报告进行相应的数据统计分析。计算本室上报数据与回报结果设定的靶值的回收率,回收率计算公式：回收率=(本室上报值/回报靶值)×100%，回收率控制在90%～110%之间且偏移(Bias)<1/2TEa,偏移计算公式：偏倚=(本室上报值-回报靶值)/回报靶值×100%，则该项目正确度符合要求，验证通过。

1.4.3线性范围验证 依据NCCLS EP6-A2对线性范围进行验证。选择患者新鲜血清，使用单独或混合的方式获取高值和低值样品浓度(严格按照试剂说明书进行选择)，使其与厂家声明的线性范围上限接近(高于上限约20%～30%浓度更好)。使用低值(L)、高值(H)血清按一定比例关系配制形成系列浓度的混合血清，各取份数按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的比例配置混合，形成系列验证样品。计算出以上6个样品的理论浓度，并对配制的6个样品进行重复测定，每份样品重复测定2次，所有测定在1个分析批2 h内完成，将实测值与理论值作比较。采用平均斜率法计算回归方程:Y=bX+a,斜率b在0.97～1.03且r2≥0.95,a与0做t检验判断是否有差异性,所有数据在范围内则线性范围通过验证。

1.4.4参考区间验证 依据卫生行业标准《WS/T 402-2012 临床实验室检验项目参考期间的制定》的规定，随机选择20例表面健康、体检合格的健康体检者，抽取样本进行检测。对结果进行统计并与试剂说明书提供的参考区间进行比较。≥90%以上的检测结果在参考区间范围内(判定标准R=测定结果在参考范围的例数/总测定例数×100%，结果≥90%为合格)说明该参考区间符合对健康人群的筛选，即参考区间验证通过。

2 结 果

2.1精密度验证结果 精密度验证通过，见表1。

2.2正确度验证 以2017年(最近)2次参加卫生部临床检验中心EQA室间质量回报的10个检测结果数据为依据，对回馈的报告进行相应的数据统计分析。计算本科室上报的数据和设定靶值的回收率及平均偏移(Bias)，4项检测项目回收率均控制在90%～110%之间且Bias<1/2TEa，所有项目正确度符合要求，验证通过。

2.3线性范围验证 线性范围验证通过，见表2。

表1 2个水平血清批内不精密度及总不精密度(中间/室内)结果

表2 线性范围验证结果

2.4参考区间 检测项目CA19-9、CA15-3、hCG、TSH所选20例健康体检者，检测结果有19例或20例在参考区间内，即95%以上的检测结果在参考区间内，R值依次为100%、95%、100%、95%，均符合≥90%的判断验证标准，说明该参考区间符合对健康人群的筛选，参考区间验证通过。

3 讨 论

对检测系统进行主要性能评价，是检验质量的重要保证，其分析性能能够满足临床要求是医学实验室认可和检验结果互认的根本保证[6]。检验人员也应对所使用仪器的性能全面了解，才能更好地完成临床检验工作。检测系统的验证项目通常包括准确度、精密度、线性范围、参考区间等性能指标，达到厂家所声明的范围即为验证通过。

回归方程b值均在1.00±0.03范围内，相关系数r≥0.975，表明本仪器线性范围良好，在线性范围内的检测结果准确可靠。参考区间是指依据所有参考值的分布特性以及临床使用要求，选择合适的统计方法进行归纳分析后确定的限值，包括参考上限和参考下限，90%以上的健康人群检测结果在参考区间范围内，说明该参考区间符合对健康人群的筛选[11]。参考区间验证均通过，说明厂商提供的参考区间适用于健康人群筛查，符合临床要求。

本实验研究分别选取2项激素和标志物进行研究，目的是对电化学发光检测系统制定出切实可行的验证方案，以此方案对其他激素检测项目及标志物检测项目依次进行验证。根据国家相关要求，医学实验室每年必须对所有检测项目进行1次验证，以保证检测结果的准确性。在实际工作中，本实验室已对目前所开展的35个电化学发光检测项目进行验证，以保证检测结果达到质量目标要求。本次研究表明，根据NCCLS及相关文件要求，对罗氏电化学发光系统主要性能指标精密度、正确度、线性范围、参考区间与厂家提供的资料比较，均达到厂家声明的性能标准，各项指标性能均验证通过，说明该4项检测项目能为临床诊断和治疗提供准确的检测结果，满足临床需求。在今后的研究中，应对其他性能指标，如：灵敏度、特异度、临床可报告范围以及存在性别、年龄，甚至生理周期不同的不同参考区间等性能指标进行验证。NCCLS及相关文件要求中，对部分指标的验证方法按不同的验证等级提供给用户进行选择，用户在实验室条件允许的情况下，应选择使用更高级别的方法对相应性能指标进行验证，以保证验证方法的权威性及可行性，为临床提供准确可靠的检测结果。