东莞地区女性健康体检者HPV感染率、亚型分布特点及TCT筛查结果分析

沈诚，罗秀霞

1.东莞市横沥医院检验科，广东 东莞 523460；2.东莞市人民医院检验科，广东 东莞 523000

宫颈癌作为女性群体中较为多见的恶性肿瘤，其在我国的患病率仅低于乳腺癌，具有较高的致死率，且患病群体越来越趋向年轻化。该疾病的致病机制为人乳头瘤病毒(HPV)感染，患者机体受损的宫颈上皮中极易寄生HPV，而HPV的寄生使其受损的宫颈上皮长时间处于感染状态，两者恶性循环从而出现上皮细胞的不典型增殖，造成上皮瘤变，而后恶化为宫颈癌[1-2]。目前已有科学研究表明，女性长期感染高危型HPV 病毒会诱发宫颈癌[3]，而将HPV病毒类型划分为高危型与低危型的主要依据为其寄生于细胞中的活动性，其中低危型HPV 会引发生殖道炎症、生殖器疣等，高危型HPV 会诱发宫颈癌前病变、宫颈癌等[4-5]。因个体所在区域及年龄等因素的不同，HPV亚型存在些许差异，因此为开展全面筛查宫颈癌并进行针对性防治，需事先分析并充分掌握本地区女性群体HPV感染的基因亚型及其分布特点。早期子宫病变筛查的基本方法为液基薄层细胞学检查(TCT)，该项检查方法与过去所采用的宫颈刮片相比敏感度和特异性更高，TCT 制备成片优势明显，所展现图片清晰方便进行阅片，但其在临床筛查宫颈病变中仍存在一定局限性[6-7]。本研究旨在探讨东莞地区女性健康体检者HPV 感染率、亚型分布特点及TCT 筛查结果，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性收集2021 年1 月至2022年6 月于东莞市横沥医院进行HPV 分型检测及TCT筛查的300 例女性健康体检者的临床资料。年龄23～71 岁，平均(37.32±6.28)岁。纳入标准：(1)均为健康体检者；(2)资料完整。排除标准：(1)不符合纳入标准；(2)接受过治疗、化疗或宫颈手术；(3)患有宫颈癌等妇科疾病。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 受检者统一取截石位，使用一次性窥阴器将阴道打开，宫颈呈完全暴露状态，使用无菌棉签轻轻刷取受检者宫颈的分泌物，将宫颈刷缓缓深入，使中央刷毛部分插入受检者子宫颈口，较短的刷毛能完全接触到受检者子宫颈口，沿顺时针方向缓慢旋转5 圈以上，保证宫颈刷上沾取到脱落的宫颈细胞，将宫颈刷头推入细胞保存液中保存，将沾取的宫颈细胞充分漂洗到保存液中，可适当震荡瓶子，密封标记后放置合适温度的环境下待检。

1.2.2 HPV 分型检测 采用通用引物多重PCR扩增及流式荧光杂交分型检测法同时对HPV6、11、16、18、26、31、33、35、39、40、42、43、44、45、51、52、53、55、56、58、59、61、66、68、81、82、83 等27 种型别进行检测。试剂盒共设有2类探针及28颗分类微球，对分类微球进行探针包被，探针信号为阳性时即判定该型别HPV 阳性。HPV 分型检测时，第一步先PCR 扩增待检测样本的DNA，依据碱基互补配对的原则，将扩增得到的PCR 产物与分类微球上交联的探针进行杂交，随后加入荧光标记物以标记反应，后在流式荧光检测仪上对荧光信号进行检测。若扩增得到的PCR 产物与分类微球上交联的探针完全配对，那么分类微球上相应探针捕获到标有Biotin 的PCR 产物，加入荧光标记SA-PE 后形成微球-探针-PCR 产物-Biotin-SA-PE复合物，在检测仪上就能够检测到分类微球的荧光信号。若扩增得到的PCR 产物与分类微球上交联的探针不配对，那么分类微球的荧光信号为背景信号，通过软件对所得到的数据进行分析后，可以直接判断结果。整个检测过程由有专业证书的操作人员在PCR 实验室内严格按照规章制度及操作说明进行。

1.2.3 TCT 筛查 对受检者脱落的宫颈细胞进行采集，完成后统一安排置于自动液基薄层细胞制片仪(ThinPrep 5000 Processor)上自动制片，95%酒精固定，采用巴氏染色法进行染色后置于生物显色镜下进行观察。依据TBS 分类可将宫颈病变诊断为无上皮内病变或恶性改变(NILM)、非典型鳞状细胞(ASC-US)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)以及鳞状细胞癌(SCC)。NILM 判定为TCT筛查结果阴性，其余4类均为阳性。

1.2.4 病理活检 若受检者TCT筛查结果为阳性需进一步行阴道镜检查，仪器选用飞利浦金科威SLC-2000B，做5%冰醋酸试验和5%卢戈式碘试验，在受检者疑似病变的部位取宫颈活检，组织送病理检查；对于未发现病变的受检者，可以常规在宫颈3 点、6 点、9 点、12 点处取宫颈活检，组织送病理检查。病理检查结果通常为慢性炎症、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌(CC)。慢性炎症判定为病理检查结果正常，其余4 类均为病理检查结果异常。

1.3 统计学方法 应用SPSS20.0 统计软件进行数据分析，计数资料比较采用χ2检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 东莞地区女性健康体检者的HPV 感染情况 300 例女性健康体检者的HPV 感染率为17.00%(51/300)，其中单一感染的阳性占比、感染率均明显高于双重感染和多重感染，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

2.2 HPV基因亚型感染分布情况 51例阳性标本中共检测出15种高危型和5种低危型，其中高危型HPV 感染率最高的亚型为HPV-52 (5.00%，15/300)，低危型HPV 感染率较高的亚型为HPV-81 (2.00%，6/300)，见表2。

表2 HPV基因亚型感染分布情况Table 2 Distribution of HPV gene subtypes infection

2.3 不同年龄组体检者的HPV感染情况 ＞55岁年龄组体检者的HPV感染率明显高于其他年龄组，差异有统计学意义(P＜0.05)；＜25岁、25～35岁、36～45岁、46～55 岁组患者的HPV感染率比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表3 不同年龄组体检者的HPV感染率比较(例)Table 3 Comparison of HPV infection rate among different age groups(n)

2.4 HPV、TCT 单独及联合筛查对宫颈病变的检出率比较 HPV 联合TCT 筛查宫颈病变的阳性检出率为18.34%，明显高于TCT 单独筛查的3.33%，差异有统计学意义(P＜0.05)，而联合筛查与HPV 单独筛查的阳性检出率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表4和表5。

表4 HPV、TCT筛查宫颈病变的结果(例)Table 4 Results of cervical lesions screened by HPV and TCT(n)

表5 HPV、TCT筛查宫颈病变的检出率Table 5 Detection rate of cervical lesions by HPV and TCT screening

3 讨论

HPV作为最常见的性传播病毒，是宫颈癌的主要病因，患者往往因过早接触性生活、性伴侣更换频繁、经常服用避孕药等行为感染HPV病毒[8]。患者感染后机体免疫力可以清除大部分HPV病毒，但长期感染高危型HPV病毒会造成多个部位癌前病变。因此，充分分析并掌握本地区女性群体的HPV 感染状况及基因亚型分布、年龄分布等特征，以此为基础及早、准确筛查宫颈癌的相关危险因素，并加以预防，不仅可以显著降低宫颈癌及相关疾病的发病率，同时还可大大降低患者的死亡率。

本研究显示，东莞地区300 例女性健康体检者的HPV 感染率为17.00%，其中与双重感染和多重感染的阳性占比、感染率相比，单一感染的阳性占比、感染率明显更高。东莞地区女性健康体检者的HPV 感染率较高，分析其原因可能与受检者的年龄、从事职业、是否过早接触性生活、性伴侣的多少等因素密切有关；感染类型多为单一感染，但也存在双重和多重感染，双重和多重感染会进一步增加宫颈癌的风险，因此，加强对女性HPV 的早期筛查及感染类型的检测对宫颈癌的诊断和针对性防治有着重大意义，针对双重和多重感染的患者，采取物理及药物治疗的效果更好[9-10]。本研究还发现，51 例阳性标本中共检测出15种高危型和5种低危型，其中高危型HPV感染率最高的亚型为HPV-52，低危型HPV 感染率较高的亚型为HPV-81，与亚洲女性HPV感染情况基本相符，但因本研究选取的研究对象数量较少，与其他研究报道仍有一定差异性，且本研究显示＞55 岁年龄组体检者的HPV 感染率明显高于其他年龄组，其中36～45 岁和＞55 岁年龄组的感染率较高，由此可见在女性整个年龄段中会出现两次HPV 感染的高峰。分析原因，36～45 岁女性HPV暴露机会不断累积增加，身体机能也不断下降，机体内激素分泌开始出现紊乱，生理环境、生理结构发生改变，且机体的抵抗力不断下降，因此导致HPV感染概率也会增加[11-12]。＞55 岁女性为绝经期，该年龄段女性群体的卵巢功能明显减退，雌激素水平也明显降低，同时乳酸杆菌减少及阴道pH 值变化等原因引起机体免疫功能减退，由此导致其清除HPV 病毒的能力大大减弱，最终造成此年龄段HPV 感染率相比其他年龄段更高[13-14]。因此需进一步强化对36～45岁和＞55 岁女性宫颈病变及宫颈癌的筛查力度，并做好针对性防治工作，鼓励HPV 感染高峰年龄段女性保持良好的生活作息，合理饮食并适度锻炼，从而增强机体抵抗力。

有研究显示，对于相关危险因素及早进行筛查及干预能够显著减少宫颈癌的患病率[15]。TCT、HPV、阴道镜活检在宫颈癌筛查中均有一定的优劣势，将其搭配应用进行合理联查可有效互补。本研究发现相比HPV、TCT 单独筛查，HPV、TCT 两者联合筛查对宫颈病变的阳性检出率高于TCT单独筛查，差异有统计学意义(P＜0.05)，但联合筛查与HPV 单独筛查的阳性检出率比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，表明两者联合对宫颈病变的筛查价值较高。究其原因在于行TCT筛查可以初步判断受检者宫颈细胞是否有异常，且其临床操作较为简单方便，适用于大范围群检当中；但该项检查弊端在于需要掌握一定的取样技术，人为的误差可能导致漏诊、过度诊断等差错[16-17]。HPV 感染作为宫颈癌患者的主要病因，有效评估受检者是否感染HPV 对于宫颈癌的临床筛查及防治起到关键作用。但阴道镜病理活检为有创检查，并不适合应用于大范围群检当中，且HPV分型检测并不能单独作为筛查标准，因此可结合HPV与TCT共同进行筛查以获得最佳检查结果。体检医师在筛查宫颈病变时，除了严格遵守筛查规定，同时也应当遵循个性化原则，结合受检者以往的体检结果详细询问基本信息，为患者制定合理适宜的筛查方案；对宫颈癌发病高峰年龄段受检者应建议其进行HPV、TCT 联合筛查，可以更细致地观察其宫颈细胞学形态情况，从而准确判断其是否感染HPV[18-19]。

综上所述，东莞地区女性健康体检者的HPV感染率较高，多为单一感染，感染率较高的感染类型为HPV-52、HPV-81，高 发 人 群 为36～45 岁 和＞55 岁；HPV、TCT 两者联合筛查能够显著提高对宫颈病变的阳性检出率，更利于患者早期诊断、治疗及促进预后。体检医师应合理建议受检者进行HPV、TCT 联合筛查，及早诊断并及时开展针对性干预治疗。同时，各地区应积极进行HPV 感染相关知识的宣传及教育，提倡和谐、健康的性生活，同时提高适龄女性群体接种HPV疫苗的意识，有效降低HPV感染率。