miR-27a和miR-128在种植体周围炎患者龈沟液中的水平及其与骨吸收的关系

沈苗苗,陈 玲,翟云霞

1.上海长征医院口腔科,上海 200001;2.上海中医药大学附属龙华医院病理科,上海 230032

种植体周围炎是一种免疫介导的炎症性疾病,表现为种植牙周围软组织炎症和骨吸收加速,会长期影响种植体,甚至最终导致牙种植修复失败[1]。大约四分之一种植牙患者患有种植体周围炎,并且每年放置的植入物数量不断增加,导致种植体周围炎发生情况增加[2]。因此,种植体周围炎的早期发现和治疗对于牙齿健康至关重要。近年来关于miRNA在炎症性疾病(如牙周病)病理过程以及骨形成和重塑中的作用研究越来越多[3]。miR-27a过表达有效减少了支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平[4],miR-27a能够有效抑制炎症反应[5-6],miR-128过表达增强了正常大鼠肾细胞中促炎细胞因子和纤维化相关基因的表达[7],但miR-27a和miR-128与种植体周围炎骨吸收的关系鲜有报道。因此,本次研究将探讨miR-27a和miR-128在种植体周围炎患者龈沟液中的水平及其与骨吸收的关系,以期为临床种植体周围炎的研究提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2018年1月至2021年12月于上海长征医院口腔科(下称本院)进行牙种植修复的136例患者纳入研究,根据种植牙状况分为健康种植体患者[探诊深度(PD)≤3 mm,龈沟出血指数(SBI)≤2]66例(健康组)和种植体周围炎患者(PD>3 mm,SBI>2)70例(炎症组)。健康组:男36例、女30例,年龄22～38岁、平均(28.50±3.12)岁,体重指数(BMI)为(22.45±2.65)kg/m2。炎症组:男38例、女32例,年龄22～40岁,平均(28.30±3.21)岁,BMI为(22.48±2.64)kg/m2。另外,选择同期于本院检查的牙龈健康志愿者70例作为对照组,其中男37例、女33例,年龄21～38岁、平均(28.60±3.18)岁,BMI为(22.51±2.69)kg/m2。种植体周围炎患者纳入标准:(1)符合种植体周围炎诊断标准[8];(2)首次进行种植牙修复术;(3)种植修复完成后6个月进行相关检查,种植前后影像学资料完整。排除标准:(1)患有慢性咽炎等炎症性疾病;(2)妊娠期或哺乳期女性;(3)近期使用过抗菌药物;(4)患有免疫性疾病。

1.2方法

1.2.1龈沟液中miR-27a和miR-128的水平检测 所有受试者使用清水漱口,采用无菌的干燥棉球擦干牙齿表面,使用探诊去除菌斑,气枪吹牙龈处,用2 mm×15 mm的滤纸条插进牙龈下1 min,取出可用于检测的浸润长度并剪下置于100 μL的生理盐水中,匀速振荡2 h,以1 500 r/min离心8 min,取其上清液待用。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测龈沟液中miR-27a和miR-128的水平。使用TRIzol RNA提取试剂(货号:R1030,北京普利莱基因技术有限公司)提取总RNA,采用反转录试剂盒(货号:HY-K0510A,美国MedChemexpress生物科技公司)将RNA反转成cDNA,使用2×SYBR Green Fast qPCR Mix(货号:G3325-01,北京博沃尔斯生物科技有限公司)进行qPCR反应。反应总体系为18 μL:2×SYBR Green Fast qPCR Mix 9 μL,上、下游引物各0.9 μL,cDNA 0.8 μL,ddH2O 6.4 μL。反应条件:95 ℃ 5 min,95 ℃ 10 s,59 ℃ 30 s,72 ℃ 10 s,共40个循环。循环结束后,立即分析熔解曲线。重复3次,采用U6作为miR-27a和miR-128检测的标准化内参,采用-ΔΔCt法计算miR-27a和miR-128的相对表达水平。引物序列如下,正向miR-27a 5′-ATGGTTCGTGGGTTCACA-3′,反向5′-GTGGCTAAGTTCCGACG-3;miR-128正向5′-GGTCACAGTGAACCGGTC-3′,反向5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3;U6正向5′-GCTTCGGCAGCACATATAAAAT-3′,反向5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3。所有引物由金唯智生物科技有限公司合成。

1.2.2资料收集 收集所有纳入研究者PD、SBI、龈沟液量及龈沟液中α、IL-6、IL-4水平的数据。

1.2.3骨吸收量测定 所有患者行种植修复术后即刻和6个月后分别行锥形束CT(CBCT)检查,并采用相应软件进行图像处理及分析,采用Planmeca remexis软件测量牙槽嵴高度[9],即为种植体根部到颈部的垂直距离,高度变低的数据即为骨吸收量。

2 结 果

2.1各组一般资料以及临床指标比较 与对照组相比,炎症组和健康组PD、SBI、龈沟液量、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平升高,IL-4水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与健康组相比,炎症组PD、SBI、龈沟液量、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平均升高,IL-4水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。三组间性别、年龄、BMI比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组一般资料及检测指标比较(n/n或

2.2三组龈沟液中miR-27a和miR-128的水平比较 与对照组比较,炎症组和健康组龈沟液中miR-27a水平降低,miR-128水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与健康组比较,炎症组龈沟液中miR-27a水平降低,miR-128水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 三组龈沟液中miR-27a和miR-128的相对表达水平比较

2.3种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a和miR-128的水平的相关性分析 种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a和miR-128水平呈负相关(r=-0.365,P=0.002),见图1。

图1 种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a和miR-128水平的相关性分析

2.4龈沟液中miR-27a和miR-128水平与临床指标的相关性分析 种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a的水平与PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平均呈负相关(P<0.05),与IL-4水平呈正相关(P<0.05);miR-128水平与PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平均呈正相关,与IL-4水平呈负相关(P<0.05)。见表3。

表3 龈沟液中miR-27a和miR-128水平与临床指标的相关性分析

3 讨 论

尽管种植牙成功率很高,但种植体周围炎是种植牙中最常见的并发症[10-12]。既往研究表明,近45%的种植体部位和近55%的种植体患者可能患有种植体周围炎,这主要表现为种植体周围组织损伤,特别是种植体周围炎症及骨吸收[13]。因此,研究与种植体周围炎相关的生物标志物对种植体周围炎的治疗具有重要意义。

miR-27a-3p上调抑制滑膜成纤维细胞增殖和炎症[14]。miR-27a在遭受创伤性脑损伤的脑组织中水平降低,并且miR-27a过表达会抑制促凋亡Bcl-2蛋白表达,减弱神经元凋亡[15]。有研究表明,miR-27a过表达通过抑制创伤性脑损伤后叉头蛋白O3A抗体介导的神经元自噬来改善脑损伤部位炎症[16]。本研究表明,与对照组相比,炎症组和健康组龈沟液中miR-27a水平显著降低,与健康组相比,炎症组龈沟液中miR-27a水平显著降低,提示miR-27a水平可能与种植体周围炎的发生进程有关联。进一步研究不同组别骨吸收量的情况,研究表明,与健康种植体患者和健康者相比,种植体周围炎患者PD、SBI、龈沟液量、骨吸收量显著升高[17]。本研究的结果表明,与对照组相比,炎症组和健康组龈沟液中PD、SBI、龈沟液量、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平显著升高,IL-4水平显著降低,与既往研究结果一致[16],表明种植体患者存在骨吸收及炎症。种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a水平与PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平呈负相关,与IL-4水平呈正相关,表明miR-27a与炎症及骨吸收相关,进一步说明miR-27a可以成为评估种植体周围炎骨吸收的生物学指标。

miR-128-3p在骨关节炎中的水平显著升高[18]。发炎软骨细胞中miR-128上调抑制软骨细胞自噬,并通过影响Atg12加重膝关节骨关节炎[19]。本研究表明,与对照组相比,炎症组和健康组龈沟液中miR-128水平显著升高,与健康组相比,炎症组龈沟液中miR-128水平显著升高,提示miR-128可能参与炎症反应,参与种植体周围炎的发展。miR-128水平与PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平呈正相关,与IL-4水平呈负相关,表明miR-128水平与炎症因子以及骨吸收量具有相关性,进一步表明miR-128在种植体周围炎的发生过程中发挥重要的作用。相关性分析显示,种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a和miR-128水平呈负相关关系,提示二者共同参与种植体周围炎的进展。

综上所述,种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a呈低水平,miR-128呈高水平,二者与骨吸收相关。但本次研究纳入研究的样本量较少,后期会扩大样本量和延长研究随访时间,进行更为深层入的探讨。