血清IL-7和Hcy水平与胃癌患者Lauren分型及病灶内上皮间质转化的关系

宫向良,刘 征,徐爱芳,李世龙,丁 梅,宋 扬

1.唐山中心医院腔镜外科,河北唐山 063000;2.唐山市人民医院检验科,河北唐山 063000

胃癌发病的隐匿性较高,大部分患者确诊时已为中晚期,尽管通过治疗能延长一段生存时间,但胃癌复发率较高,预后不良者较多。胃癌的诊断主要依靠胃镜、组织病理检查,但均存在一定的局限和不足,大范围筛查比较困难。肿瘤标志物的研究取得较大进展,很大程度提升了诊断效率[1]。白细胞介素(IL)-17是重要促炎因子,与各种炎症的发生均紧密相关[2]。同型半胱氨酸(Hcy)属氨基酸代谢物,在各种癌症患者血清中呈高水平[3]。为了结合癌细胞生物学评估预后,人们提出了多种胃癌分型方法,其中Lauren分型是临床中应用最广的一种,肠型与弥漫型胃癌的高发年龄、性别、生长转移方式存在区别[4]。研究表明,炎症在胃癌的疾病进展中起到十分关键的作用,炎症微环境可以促进肿瘤侵袭转移。炎症可诱导上皮间质转化(EMT),促进肿瘤侵袭。同时,神经降压素(NTS)/IL-8介导的炎症反应也已被证实在结肠癌侵袭中发挥作用[5]。在前期工作中,本课题组通过生物信息学挖掘,发现胃癌中NTS与炎症基因表达紧密相关。因此,本研究通过免疫组化法验证胃癌中是否存在NTS异常表达,同时也分析了胃癌患者血清IL-17、Hcy水平与胃癌患者Lauren分型及病灶内EMT相关指标的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 将唐山中心医院2021年5月至2023年5月收治的原发性胃癌患者78例纳入研究作为胃癌组。纳入标准:(1)经胃镜、病理检查确诊;(2)无法手术,局部晚期或转移性胃癌;(3)可耐受且愿意接受治疗;(4)血常规及肝功肾功检查结果正常。排除标准:(1)近1个月服用过影响研究的药物;(2)合并其他恶性肿瘤,或有严重感染、心梗、中风;(3)有既往治疗史;(4)混合型或其他无法分型胃癌患者。另外,选取同期于唐山中心医院就诊及治疗的78例胃良性病变者作为良性病变组,选取同期于唐山中心医院体检的健康者78例作为健康对照组。胃癌组中,男41例、女37例,年龄40～75岁、平均(56.19±10.01)岁;病变部位:胃窦19例、胃体28例、贲门31例;侵入深度:早期34例、进展期44例;TNM分期:Ⅰ～Ⅱ期33例,Ⅲ～Ⅳ期45例;分化程度:高、中、低分化分别24、19、35例;转移:有转移31例,无转移47例。良性病变组中,男39例、女39例,年龄41～76岁、平均(56.22±10.02)岁;病变类型:慢性浅表性、萎缩性胃炎分别为37、26例,不典型增生15例。对照组中,男44例、女34例,年龄41～76岁、平均(56.12±10.06)岁。3组间,年龄、男女性别比例等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。纳入研究者均对本研究知情同意并签署知情同意书。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1血清IL-7和Hcy检测 胃癌组于术前(良性病变组和健康对照组分别于就诊日或体检当日)取清晨空腹静脉血3～5 mL,置于低温离心机,以2 500 r/min,离心10 min,取上清液,置于-70 ℃冰箱中保存。采用酶连免疫吸附测定法(ELISA)检测IL-17,检测试剂盒购自上海臻科生物科技有限公司,检测仪器为多功能酶标仪(型号为EnVision Nexus,瑞孚迪生物医学公司)。采用全自动生化分析仪(型号为SK6000,深圳市盛信康科技有限公司)检测Hcy,检测试剂盒购北京康思润业生物。严格按相关说明书及性能操作。

1.2.2病灶内EMT相关指标检测 根据Lauren分型标准[6]将胃癌患者分为弥漫型胃癌组(35例)和肠型胃癌组(43例)。将胃癌组患者经手术切除的胃癌组织做成组织切片,取良性病变组胃镜活检组织做成病灶组织切片。采用免疫组化法检测组织中的NTS、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、β-连接素(β-catenin)、上皮性钙黏附蛋白(E-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CD68D等EMT相关指标。具体步骤:取标本切片经脱蜡、抗原修复、去过氧化物酶及封闭后,每个样品滴加50 μL上述指标的相应一抗4 ℃过夜,二抗于37 ℃孵育0.5 h,DAB显色,复染,脱水干燥,透明,封片,显微镜下观察染色结果。兔抗人MMP-9多克隆抗体、鼠抗人VEGF、β-catenin、E-Cadherin、Vimentin单克隆抗体、CD68、抗鼠/兔二步法检测试剂盒、稀释液、DAB显色剂、均购自福州迈新生物公司。NTS、IL-8的一抗则购自上海恪敏生物科技。阳性细胞评定标准:细胞质、胞膜有棕黄色颗粒,NTS、IL-8、VEGF、MMP-9着色于胞质,CD68着色于胞质和胞膜。显微镜下随机选10个高倍镜(×400)视野,每个视野计数100个细胞[7],计算细胞染色阳性率(PR)。

2 结 果

2.13组血清IL-7和Hcy水平比较 胃癌组血清IL-17、Hcy水平均高于良性病变组及健康对照组,良性病变组血清IL-17、Hcy水平均高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 3组血清IL-7和Hcy水平比较

2.2胃癌组与良性病变组病灶EMT相关指标PR比较 胃癌组病灶组织NTS、IL-8、VEGF、MMP-9、CD68、β-catenin、E-Cadherin、Vimentin的PR均高于良性病变组(P<0.05),见表2。

表2 3组EMT相关指标PR比较

2.3不同Lauren分型胃癌患者的血清IL-7和Hcy水平比较 肠型胃癌组血清IL-17、Hcy水平高于弥漫型胃癌组(P<0.05),见表3。

表3 不同Lauren分型胃癌患者的血清IL-7和Hcy水平比较

2.4血清IL-7和Hcy水平与病灶内EMT相关指标PR的关系 Pearson相关分析显示,血清IL-7和Hcy水平与病灶组织NTS、IL-8、VEGF、MMP-9、CD68、β-catenin、E-Cadherin、Vimentin等EMT相关指标PR均呈正相关(P<0.05),见表4。

表4 血清IL-7和Hcy水平与病灶内EMT相关指标PR的关系

续表4 血清IL-7和Hcy水平与病灶内EMT相关指标PR的关系

3 讨 论

胃癌是消化道常见肿瘤,其发病受诸多因素共同影响。临床实践证实,慢性胃炎、溃疡等均可发展为胃癌,因其早期无典型症状,大部分患者确诊时已发展为胃癌晚期,错过了最佳治疗时机[8]。胃癌的发病机制尚未完全明确,但可以肯定的是,通过有效筛查可以降低胃癌病死率[9]。胃镜及病理检查作为临床诊断金标准,虽然诊断准确率高,但胃镜检查造成的痛苦大,而且心脑血管疾病患者对此无法耐受,存在局限性[10]。

炎症是诱发胃癌的重要因素,随病情进展,机体炎症免疫反应会加重。IL-17是由Th17细胞分泌,IL-17与其受体IL-17R结合,诱导炎症因子分泌,发挥促炎效应,增强免疫反应及造血功能等[11]。IL-17在多种类型癌症患者血清中呈高水平,而且与肿瘤血管生成紧密相关[12]。RAO等[13]的研究显示,与健康者相比,胃癌患者血清IL-17水平更高。胃癌组织中IL-17B、IL-17RBD均高表达,提示IL-17与胃癌疾病进展可能存在关系。本研究结果显示,胃癌组血清IL-17水平高于良性病变及健康对照组,原因可能为IL-17能促进肿瘤微血管生成和细胞分化。Hcy是蛋氨酸去甲基化的产物,能在维B12及叶酸等的催化下再代谢。谈利等[14]的研究结果与本研究结果相似,但是其未具体分析Lauren分型与IL-17水平的关系。ZHAO等[15]的研究显示,Hcy在癌前病变组织中均有不同程度的表达,也在胃癌中高表达,此外,其还参与胃癌的发生发展,可作为早期鉴别诊断胃癌及癌前病变的指标。

EMT属生物过程,可使上皮细胞发生多次生化改变,是上皮源性癌症复发转移的基础。在NTS、IL-8均为阳性的胃癌样本中观察到很多炎症蛋白及E-Cadherin膜表达丢失和胞浆内β-catenin和Vimentin堆积,VEGF、MMP-9高表达,CD68+肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润,提示NTS/IL-8活化致胃癌中炎症反应增强,NTS/IL-8活化参与胃癌EMT[16]。

胃癌属于异质性疾病,有肠型及弥漫型两种组织分化类型[17]。本研究分析了两种Lauren分型的胃癌患者间血清IL-7和Hcy水平差异,发现肠型胃癌组血清IL-7和Hcy水平较高,提示血清IL-7和Hcy水平与胃癌组织病理分型紧密相关。弥漫型胃癌主要由活动性炎症引起,大面积侵袭胃壁,在胃体和全胃较为高发,肠型胃癌在胃窦和胃角等部位较为高发。弥漫型胃癌胞外基质重塑致肿瘤基质致密、血管生成,导致肿瘤抗原低表达,因此弥漫型胃癌的炎症活动性较低。反之,肠型胃癌主要由慢性炎症进展而来[18]。不同Lauren分型的胃癌患者的炎症反应存在区别,可能为延缓胃癌的病情进展或阻断其侵袭转移的研究提供新思路。相关性分析结果提示,Hcy与胃癌患者Lauren分型及病灶内EMT相关指标PR有相关性。余璠等[19]分析发现胃癌患者外周血Hcy水平升高,其水平与肿瘤分化程度、病理分期、淋巴结转移有关,Hcy水平可作为疾病诊断/筛查与预后评估指标,但是该研究并未进一步分析Hcy与胃癌患者Lauren分型及病灶内EMT相关指标的关系。

综上所述,IL-17、Hcy在胃癌患者血清中呈高水平,与Lauren分型及病灶内EMT相关指标有关。