特发性血小板减少性紫癜患儿血清LXA4、ADAMTS-1水平及其在预后评估中的价值

刘朝阳,李 琛,宫经新,王文娟,朱翠敏,刘娜娜,刘秀芬

沧州市中心医院儿内科,河北沧州 061000

特发性血小板减少性紫癜(ITP)是获得性器官特异性自身免疫性疾病,是一种常见的临床出血性疾病,发病机制尚不明确[1]。相关研究发现ITP的主要病理生理机制为体液免疫机制出现异常,引发血小板表面结合自身抗体,促使血小板在降解过程中暴露出隐匿性表位,此时抗原提呈细胞识别隐匿性表位的T细胞,激活血小板相关抗体,最终导致血小板减少[2]。脂氧素A4(LXA4)是内源性抗炎脂质介质中的一种,具有较强的抗炎作用,能在炎症反应消退过程中发挥重要作用[3-4]。相关研究显示,在培养的巨噬细胞中,LXA4能够抑制脂多糖(LPS)诱导的炎症极化,从而减少促炎细胞因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]的释放并增加抗炎细胞因子(IL-4及IL-10)的释放[5]。含凝血酶敏感素1型基序的解聚素样金属蛋白酶(ADAMTS-1)是血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)的一个家族成员,该家族在调节血液及细胞外基质中细胞外蛋白的功能与结构方面发挥关键作用[6]。ADAMTS-1主要在巨噬细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞表达,参与生理病理过程的方式为降解细胞外基质蛋白[7]。虽然LXA4与ADAMTS-1表达都与巨噬细胞相关,但二者在ITP中的表达情况尚不清楚,本研究探讨LXA4与ADAMTS-1在ITP患儿预后评估中的价值,以期能为ITP的治疗提供帮助。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2020年8月至2022年8月于本院确诊的112例ITP患儿纳入研究作为ITP组。其中,男59例,女53例,平均年龄(5.16±1.21)岁。纳入标准:(1)符合ITP的相关诊断标准[8];(2)年龄1～12岁;(3)首次确诊,依从性良好。排除标准:(1)先天畸形或发育不全;(2)肝肾等脏器功能受损或异常;(3)有感染性或慢性疾病;(4)有恶性肿瘤或恶性血液病;(5)有继发性的血小板减少性疾病;(6)有免疫性或内分泌疾病。另选取同期于本院体检的106例健康志愿者作为对照组。其中,男56例,女50例,平均年龄(5.14±1.18)岁。本研究经过医院伦理委员会批准(批号:202000612-20),所有纳入研究者临床资料完整且本人及家属均知晓本研究内容并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1标本采集 采集所有受检者的血液标本,抽取患儿入院后次日清晨(对照组抽取体检当天)的空腹静脉血4 mL,室温静置25 min,离心10 min(3 000 r/min),对血清进行分离,取血清置于-80 ℃超低温冰箱保存待用。

1.2.2指标检测 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清LXA4与ADAMTS-1水平(试剂盒购自上海科艾博生物科技有限公司,货号:CB11748-Hu、CB12469-Hu),严格按照试剂盒说明书的步骤操作。

1.2.3病情评估 依据血小板计数(PLT)以及出血情况对患儿病情进行评估[9]。轻度:受伤后出血且PLT为50×109/L～100×109/L;中度:未出现广泛性出血,PLT为25×109/L～50×109/L;重度:自发性或广泛性出血,病情严重,PLT<25×109/L。

1.2.4随访及预后的评价 对患儿进行为期6个月随访,随访方式为门诊复查。随访截止时间为2023年2月28日。依据《血液病及治疗标准》[10],将患儿分为预后良好组(32例)及预后不良组(80例)。预后良好判断标准:出血消失,PLT恢复正常或PLT升高幅度>30×109/L,2个月内未复发;预后不良判断标准:PLT升高不足30×109/L,2个月内复发,出血症状减轻但未消失。

2 结 果

2.1两组血清LXA4、ADAMTS-1水平比较 与对照组相比,ITP组血清LXA4与ADAMTS-1的表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组血清LXA4、ADAMTS-1水平比较

2.2血清LXA4与ADAMTS-1水平的相关性分析 Pearson相关分析显示,ITP组血清LXA4与ADAMTS-1水平呈正相关(r=0.577,P<0.05),见图1。

图1 血清LXA4与ADAMTS-1水平的相关性分析

2.3不同病情患儿血清LXA4与ADAMTS-1水平比较 与轻度组比较,中度组与重度组的血清LXA4与ADAMTS-1表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组比较,重度组血清LXA4与ADAMTS-1水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同病情患儿血清LXA4与ADAMTS-1水平比较

2.4不同预后患儿血清LXA4与ADAMTS-1水平比较 预后不良组血清LXA4、ADAMTS-1水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05),见表3。

表3 不同预后患儿血清LXA4与ADAMTS-1水平比较

2.5血清LXA4与ADAMTS-1用于预测ITP预后不良的价值分析 ROC曲线分析显示,LXA4单独预测ITP预后不良的AUC为0.695,ADAMTS-1单独预测ITP预后不良的AUC为0.816,联合预测ITP预后不良的AUC为0.882。联合预测的AUC大于LXA4单独诊断的AUC(Z=3.363,P=0.001)及ADAMTS-1单独诊断的AUC(Z=2.534,P=0.011)。见表4,图2。

表4 血清LXA4、ADAMTS-1单独及联合检测对ITP预后不良的预测价值分析

图2 血清LXA4、ADAMTS-1单独及联合预测ITP预后不良的ROC曲线

2.6Logistic回归分析影响ITP预后的因素 以ITP预后是否良好为因变量(0=否,1=是),将血清LXA4、ADAMTS-1作为自变量,Logistic回归分析显示,LXA4与ADAMTS-1是ITP预后不良的危险因素,见表5。

表5 Logistic回归分析影响ITP患儿预后的因素

3 讨 论

ITP是一种获得性自身免疫性疾病,在遗传及环境因素的影响下,机体释放出针对血小板的自身抗体,介导血小板的免疫清除过程,导致患者外周血的PLT降低[11]。目前还没有针对ITP的明确诊断性检查,因此ITP的诊断仍为排除性诊断[12]。所以寻找与开发与ITP相关的血清生物标志物对于ITP的诊断与预后具有重要意义。相关研究发现,在ITP的病理过程中,有细胞免疫的参与,免疫细胞能够分泌相关的活性蛋白因子,调节机体细胞的生长分化,进而参与机体的免疫应答,最终在ITP的发生与发展中发挥关键作用[13-14]。

脂氧素(LX)是一类内源性的自体有效物质,其作用为减少组织损伤以及促进炎症的消退。LXA4是LXs家族的一员,是内源性花生四烯酸的代谢物,其可以在与甲酰肽受体样1(FPRL1)的G蛋白偶联受体结合时,表现出有效的抗炎和促催化功能[15]。LXA4主要由内皮细胞、上皮细胞及免疫细胞(包括巨噬细胞及中性粒细胞)产生,能够在细胞中起到抗炎反应及促炎反应消退的作用。LXA4在多种疾病发病及发展中发挥抗炎作用以及促炎的消退作用[16-17]。LXA4通过抑制细胞因子和基质金属蛋白酶的释放抑制人滑膜成纤维细胞的炎症反应,在类风湿关节炎患者的滑膜组织及滑液中LXA4的水平升高[18]。LXA4对炎性巨噬细胞极化的抑制作用与NF-κBp65和IRF5活性下调相关[5]。过敏性紫癜患儿中血清LXA4的表达水平升高,与患儿病情严重程度相关[19]。本研究结果显示,在ITP患儿血清中,血清LXA4的表达水平升高,而且随着病情的不断加重,血清LXA4的水平也逐渐升高,这提示LXA4不仅参与了ITP的发生而且与患儿的病情严重程度相关,可能的原因是ITP疾病发生时引发花生四烯酸的代谢异常升高,作为花生四烯酸的代谢物,LXA4的水平也异常上升,具体的作用机制及作用过程还需要进一步的探索。

ADAMTS细胞外蛋白酶家族由19个成员组成,在组织发育和体内平衡中具有不同的作用。ADAMTS-1基因定位在染色体21q21-q22,其相对分子质量约为100×103,由其编码的蛋白质包含951个氨基酸,该基因能在机体的不同组织中广泛表达,进而参与机体的生长发育过程、组织的炎症反应、生殖系统的形成过程等一系列生理病理活动[20]。相关研究显示,牙周炎患者ADAMTS-1水平显著升高,并且与临床附着水平及探查袋深度显著相关[21]。在冠心病患者血清中ADAMTS-1与炎症因子IL-18、IL-8、IL-6、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)呈正相关,ADAMTS-1可以反映冠心病患者机体的炎症程度[22]。在本研究中,ITP患儿血清ADAMTS-1水平高于健康儿童,并且随着病情的严重,ADAMTS-1的水平进一步升高,ADAMTS-1可能是通过炎症反应进而引发ITP患儿病情的加重,具体的作用途径尚需探索。

本研究中,LXA4与ADAMTS-1呈正相关,可能通过同一信号通路参与了ITP的发生与发展过程,具体作用路径还需要进一步研究。预后不良组血清LXA4与ADAMTS-1水平明显高于预后良好组,这提示血清LXA4与ADAMTS-1可能与ITP患儿的预后相关,可能是ITP潜在的治疗靶点。ROC曲线分析显示,LXA4单独预测预后不良的AUC为0.695,ADAMTS-1单独预测的AUC为0.816,这表明ADAMTS-1的单独预测具有一定的价值,LXA4与ADAMTS-1单独预测的截断值分别为71.33 nmol/L、17.15 μg/L,提示当患儿血清中LXA4>71.33 nmol/L或ADAMTS-1>17.15 μg/L时,可能有较大的预后不良风险。二者联合预测的AUC进一步的提升为0.882,这表明二者联合预测ITP患儿预后不良具有更大的价值,能够弥补血清单项检测的不足,在临床中的参考价值更大。Logistic回归分析显示,LXA4与ADAMTS-1是ITP预后不良的危险因素,这提示LXA4、ADAMTS-1与ITP患儿的预后密切相关,可以为ITP患儿的治疗提供参考。

综上所述,ITP患儿血清LXA4与ADAMTS-1表达水平升高,二者呈正相关,是ITP预后不良的危险因素,二者联合使用对ITP预后不良具有一定的预测价值。但本文选取的样本量还不够大,人群范围也不够大,后期将扩大样本量进一步分析LXA4与ADAMTS-1在ITP中发生发展的作用机制,以期能为ITP的治疗提供帮助。