盐酸文拉法辛残留溶剂检测方法的建立

袁 斌，王以武

(1.川北医学院药物研究所，川北医学院药学院，四川南充 637000;2.重庆医科大学药学院，重庆 400016)

盐酸文拉法辛(venlafaxine hydrochloride)，化学名为(±)-1-［2-(二甲胺基)-1-(4-甲氧苯基)乙基］-环已醇盐酸盐，是由Wyeth-Ayerst公司开发的、具有抑制去甲肾上腺素重吸收和拮抗5-HT双重作用机制的苯乙胺类抗抑郁药，其主要药理机制为抑制神经突触前膜对5-HT及NE的再摄取，增强人的中枢神经系统5-HT和NE神经递质的活性，发挥抗抑郁作用［1-3］。目前其原料在合成过程中，使用了多种溶剂，包括ICH规定的一类、二类和三类溶剂［4-6］。中国药典对残留溶剂测定做了相关规定［7］。为了更好控制盐酸文拉法辛药物质量，我们建立了气相色谱法用于其6种残留溶剂(乙醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、甲苯)检测，方法简单，重现性好。

1 仪器与试剂

美国安捷伦6890气相色谱仪，配置FID检测器。盐酸文拉法辛原料药(重庆康乐制药有限公司产品)，乙腈、甲醇(Scharlau Chemie S.A.)，乙醚(迪马公司)，异丙醇、乙酸乙酯、甲苯(重庆川东化工有限公司)，四氢呋喃(成都金山化学试剂厂)，以上试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Inowax(30 m ×0.32 mm ×0.25 μm);检测器:FID(氢火焰离子化检测器)，汽化室温度:150℃，检测器温度:250℃，进样量:1 μL;柱温:程序升温:起始柱温40℃ ，保持7.5 min后，以50℃/min的升温速率升至120℃，保持3.5 min;载气采用高纯度 N2，流速 1.5 mL/min，分流比为 10∶1。

2.2 溶液配置

2.2.1 内标溶液的配制 称取乙腈0.252 8 g，精密称定，置250 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，备用。

2.2.2 空白溶液的配制 精密移取纯化水1.0 mL置10 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，混匀即得。

2.2.3 标准储备溶液的配制 分别称取乙醚，甲醇，异丙醇，乙酸乙酯，甲苯，四氢呋喃各0.508 1 g，0.498 7 g，0.500 8 g，0.515 2 g，0.203 9 g，0.207 7 g，置于同一个25 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，混匀。再精密量取该溶液5.0 mL置50 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，混匀即得标准储备液。

2.2.4 标准溶液的配制 分别精密移取标准储备液及内标溶液各1.0 mL，纯化水1.0 mL置同一10 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，混匀，得到标准溶液。

2.2.5 供试品溶液的配制 取供试品约1.0 g，平行称样两份，分别置10 mL容量瓶中，加入内标液和纯化水各1.0 mL，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，混匀。

2.3 系统适用性试验

单独进空白溶液，证明该溶液对溶剂测试无干扰;单独分别进样每一个需测定的溶剂及内标的标准品，记录色谱图，确定各溶剂的出峰顺序及保留时间;配制残留溶剂测定的标准溶液(包含所有待测溶剂的混合溶液)，进样并计算分离度以确认所有溶剂间无干扰。将标准溶液加入到样品溶液中测试，确认可能出现的杂质对溶剂测定无干扰。

结果如图1所示，所有相邻溶剂峰的分离度均大于1.5，符合规定，确定所需测定的六种溶剂及内标溶剂均可以很好的分离，并且不会受到来自溶媒及可能出现的杂质干扰。

2.4 检测方法的验证

2.4.1 线性关系考察 按确认的各个残留溶剂的含量范围，配制6个不同浓度的溶液，每个浓度进样2次，记录色谱图，求出各浓度与其对应的主峰与内标物质峰面积响应比值的平均值，以二次回归得到回归方程及相关系数(表1)。

表1 回归方程和线性范围试验结果

2.4.2 最小检测限测试 配制各溶剂的标准品溶液，逐级稀释该溶液，注入色谱仪，记录色谱图，直到符合S/N=3的标准，计算各溶剂的最小检测限。乙醚、四氢呋喃、酸乙酯、甲醇、异丙醇、甲苯的最小检测限分别为 0.120 5、0.205 0、0.355 3、0.443 2、0.365 0、0.483 6 μg/mL。

2.4.3 最小定量限测试 配制各溶剂的标准品溶液，逐级稀释该溶液，注入色谱仪，记录色谱图，直到符合S/N=10的标准，计算各溶剂的最小定量限。乙醚、四氢呋喃、酸乙酯、甲醇、异丙醇、甲苯的最小检测限分别为 0.401 6、0.683 2、1.184 4、1.477 5、1.216 5、1.612 0 μg/mL。

2.4.4 精密度测试 连续进样标准溶液6次，重复进样各溶剂峰面积与内标物峰面积比值的相对标准偏差(RSD)。结果表明重复进样各溶剂峰面积与内标物峰面积比值的RSD小于4%，精密度良好(表2)。

表2 精密度试验结果(n=6)

2.4.5 回收率试验 第一步，配制待测溶剂的3个不同浓度的标准溶液，3个浓度分别为:最小定量限浓度点(低浓度)、样品溶液通常被检出的浓度点(中浓度)、标准溶液浓度点(高浓度)。第二步，定量称取样品12份，9份样品溶液中分别定量添加第一步中3个浓度的溶液，每个溶液加3份，制成准确度验证溶液。另外3份作为空白对照。第三步，每个浓度点平行测定2次。计算每个浓度点每个溶剂的平均含量。第四步，计算每个浓度点的加样回收率，结果为97.6～102.7，如表3所示。

表3 6种溶剂回收率测定结果(n=3)

3 讨论

进样方式的确定和溶剂、内标的选择:为消除基质效应对残留溶剂测定准确性与精密度的影响，应首选内标法。N，N-二甲基甲酰胺为理想的溶剂，且对6种被测溶剂均无干扰，故选用N，N-二甲基甲酰胺为溶解介质。乙腈溶液浓度稳定持久，是良好内标物;色谱柱的选择:在其他柱色谱系统下，7种组分中往往有3～4个组分因分子极性较为相似而使色谱行为差异不够明显，而选用Inowax色谱柱，则能达到中国药典2010年版二部附录ⅧP“残留溶剂测定法”的相关要求;色谱条件的确定:测定时，柱温的选择是关键，采用程序升温的方法可以改变峰形和出峰速度。我们最终选择先在柱温40℃维持7.5 min后，使低沸点组分流出，逐渐升至120℃ ，维持3.5 min，加快高沸点组分流出，取得满意的分离效果［8-10］。

本文所建方法色谱性能良好，各项方法学指标的验证结果均达到中国药典2010年版二部附录ⅧP“残留溶剂测定法”的有关要求，可用于控制盐酸文拉法辛原料药中可能存在的各种残留溶剂。

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