盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶的制备及质量评价

沈丹丹 ，刘 杰 ，黄 华 ，张 涛

（1.重庆市食品药品检验所，重庆 401121； 2.重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121；3.重庆医药工业研究院有限责任公司，重庆 400061； 4.重庆市化学制药工程技术研究中心，重庆 400061；5.重庆医科大学药剂学教研室，重庆 400016）

盐酸奥昔布宁既是M3胆碱受体阻断药，又是钙拮抗药，是临床上使用较多的M胆碱受体阻断药[1]，是1975年在美国首次上市的老药，近几年其缓释剂型被再度开发利用，且拥有良好的临床疗效[2]。研究发现，醇脂质体能够提高盐酸奥昔布宁的经皮渗透性[3]。但醇脂质体作为液体制剂，给药不方便。将盐酸奥昔布宁醇脂质体制备成凝胶剂，不仅使用方便，而且将醇脂质体分散于适宜黏度的凝胶中，脂质囊泡不易聚集，增加了醇脂质体的稳定性。本研究是在醇脂质体基础上以羟丙基纤维素（HPC）为凝胶基质，制备盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶制剂，并与自制普通凝胶比较。参照2010年版《中国药典（二部）》制剂质量标准的指导原则，进行盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶的初步质量检查及稳定性研究。

1 仪器、试药与动物

S-3400N型扫描电子显微镜（日本 Hitachi公司）；H-600型透射电子显微镜（日本日立公司）；NDJ-1型旋转粘度计（上海平轩科学仪器有限公司）；FA25型均质机（德国 Fluko公司）；TK-60B型透皮扩散试验仪大（上海锴凯科技贸易有限公司）；S212型恒速机械搅拌器（上海申顺科技有限公司）；LC-10ATVP型高效液相色谱仪（日本岛津公司）。盐酸奥昔布宁（威海迪素制药有限公司，批号为OX090301）；羟丙基纤维素（日本曹达株式会社，批号为NOE-1801）；蛋黄卵磷脂（上海艾伟特有限公司，含量98%，批号为PC98T）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。大鼠，雄性，体重（200±20）g，重庆市中药研究院实验动物中心提供，合格证号 SCXK（渝）20070006。

2 方法与结果

2.1 凝胶制备

2.1.1 OXB 醇脂质体凝胶

取适量HPC，用适量水充分溶胀后，加入一定量的乙醇，使其中乙醇浓度与醇脂质体系统中乙醇含量一致，再加入甘油，溶胀均匀即得空白凝胶基质。然后将空白凝胶基质与按已报道方法[3]制备的OXB醇脂质体溶液混合均匀，得到均匀的淡黄色透明醇脂质体凝胶。其中OXB含量为4%，乙醇含量为45%。

2.1.2 OXB 凝胶

将HPC用适量水充分溶胀后，加入一定量的乙醇、甘油，溶胀均匀。再加入一定量的药物乙醇溶液，用5 mol/L氢氧化钠溶液调 pH至 5.5，补加蒸馏水至 100%，搅拌均匀，得到透明的OXB凝胶。其中OXB含量为10%，乙醇含量为70%。

2.2 体外透皮试验

2.2.1 离体皮肤制备

取体重（200±20）g的雄性大鼠，断颈处死，剃除腹毛，剥离腹部皮肤，去除皮下脂肪，用新鲜生理盐水洗净。将上述离体皮肤平铺于2张滤纸中，于-20℃冰箱保存备用。试验前用放大镜仔细检查鼠皮的完整性，皮肤不应有任何损伤。

2.2.2 体外透皮试验

采用垂直透皮扩散实验仪，进行盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶及普通凝胶体外经皮渗透试验。扩散池有效渗透面积是2.54 cm2，接受池容积18 mL。将皮肤固定于扩散池的供给室，角质层面向供药池，真皮层面向接收池，接收池中加30%乙醇溶液作释放介质，与皮肤紧密接触，不留空腔。取定量凝胶（约25 mg）置供给室内，维持温度恒定（37±1）℃，以 200 r/min的速率恒温搅拌，于2，4，8，12，24 h 时吸取接受液 0.5 mL，同时补充等量接受液。按拟订的色谱条件测定，代入标准曲线求得浓度 Ci，药物单位面积累积透过量 Q按下试计算：

式中 Q为单位面积药物累积透过量，Ci为第i次取样时接受介质中的药物浓度，V为接收室体积，Vi为每次取样体积，A为扩散池有效渗透面积。以单位面积累积渗透量 Q为纵坐标，时间 t为横坐标作图，得药物累积渗透曲线，见图1。对所得曲线的直线部分进行回归，求出的斜率即为药物的稳态渗透速率[Jss，μg /(h·cm2）]（表 1）。结果表明，醇脂质体凝胶累积渗透率是普通凝胶剂的3.9倍。

图1 醇脂质体凝胶剂和普通凝胶剂的累积渗透百分比曲线图

表1 盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶剂和普通凝胶剂的经皮渗透特性

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 -2.5 mmol/L 磷酸盐缓冲液（80 ∶20）；流速：1.0 mL /min；检测波长：220 nm；灵敏度：0.1 AUFS；进样量：20 μL。

2.3.2 样品处理

精密称取盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶0.25 g（约相当于盐酸奥昔布宁10 mg），置25 mL容量瓶中，加5 mL无水乙醇，振摇5 min使溶解后，用流动相稀释至刻度。0.45 μm滤膜过滤，精密量取续滤液20 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。空白凝胶剂同法操作。

2.3.3 方法学考察

专属性试验：空白醇脂质体凝胶、盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶按2.3.2项下方法处理。精密量取续滤液20 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图2。在此条件下盐酸奥昔布宁与空白辅料色谱峰得到很好分离，专属性良好。

标准曲线制备：精密称取干燥至质量恒定的盐酸奥昔布宁对照品适量，置100 mL容量瓶中，用流动相配制成质量浓度为5 g/L 的贮备液。分别精密量取贮备液 0.10，0.40，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置 50 mL 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，即得一系列对照品溶液。摇匀，按拟订色谱条件，分别精密量取续滤液20 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）对质量浓度（C）进行线性回归，得回归方程 A＝2.075 5×103C+1.300 3 × 104（r＝0.999 8）。结果表明，盐酸奥昔布宁质量浓度在10～1 000 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

回收率与精密度试验：按处方配比制备空白醇脂质体凝胶，加入处方量的80%，100%，120%盐酸奥昔布宁，搅拌均匀。精密称取 0.25 g，按 2.3.2项下方法处理，使药物质量浓度分别为320，400，480 μg/mL。按拟订色谱条件，分别精密量取续滤液 20 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。取上述低、中、高3个质量浓度样品溶液各1份，分别在日内和日间各测5次，每份重复测3次，平均回收率为99.58%，RSD＝0.49%。结果的日内与日间精密度RSD均小于2%，说明该测定条件的准确度和精密度均良好。

2.3.4 样品含量测定

精密称取盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶0.25 g（约相当于盐酸奥昔布宁10 mg），按2.3.2项下方法处理，作为供试品溶液。另取干燥至质量恒定的盐酸奥昔布宁对照品适量，用流动相稀释成每1 mL含400 μg的溶液作为对照品溶液。按拟订色谱条件测定，按外标法以峰面积计算，结果批号分别为20100918-1，20100919-1，20100920-1的3批盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶的含量分别为 4.02% ，4.08% ，3.98% 。

2.4 OXB醇脂质体凝胶的质量评价

性状：本品为淡黄色透明的半固体凝胶。

扫描电镜（SEM）与透射电镜（TEM）观察醇脂质体凝胶的形态：将样品（批号为20100918-1）10 μL均匀地分散于载玻片上，于40℃过夜烘干。样品用小型离子溅射仪喷金，然后在S-3400N型扫描电子显微镜下以30 kV加速电压观测粒子形态，见图3 A。可见将醇脂质体制备成凝胶后，醇脂质体粒子形态仍然保持圆整，大小均一。另取样品滴在铜载网上，过量的样品用滤纸吸干，于格网上滴加2%醋酸铀酰溶液，除去过量的染色液，在透射电子显微镜下以40 kV检查格网，见图3 B。可见，在醇脂质体凝胶体系中，药物被包裹醇脂质体中，仍然呈圆形或椭圆形，形成单室或多室双分子层。

pH：取样品（批号为20100918-1）2 g于烧杯中，加入蒸馏水50 mL稀释后，搅拌 5 min，测得 pH为5.52。

黏度：取样品（批号为20100918-1）适量，选择 2号转子，转速为12 r/min，测得醇脂质体凝胶黏度为1 250 mPa·s。

离心试验：取样品（批号为20100918-1）5 g，置离心管中，以3 000 r/min的速率离心30 min，样品无分层现象。

耐热耐寒试验：取样品（批号为20100918-1）置60℃恒温箱和-19℃冷冻室，24 h后取出，结果凝胶外观无明显变化及无分层现象。

图3 电镜图

3 讨论

本研究在盐酸奥昔布宁醇脂质体的研究基础上，将醇脂质体载体载入HPC空白凝胶基质中，具有药物容量高、性质稳定、保湿性好、使用方便等优点。体外透皮试验表明，盐酸奥昔布宁醇脂质体凝胶累计渗透率是普通凝胶的3.9倍。相关研究证实，醇脂质体是盐酸奥昔布宁经皮给药的良好载体[3]。醇脂质体凝胶剂渗透通过皮肤角质层可能包括醇脂质体载体从凝胶基质的释放过程和扩散的醇脂质体载体与皮肤角质层融合释放药物的过程。

本研究首次采用了扫描电镜与透射电镜对醇脂质体凝胶的形态进行检测，进一步验证醇脂质体的形态在凝胶体系中不会发生改变，表明醇脂质体分散于凝胶基质中，与基质没有发生相互作用。制备的醇脂质体凝胶稳定性较好，这可能是由于凝胶基质较大的平均孔径可抑制醇脂质体囊泡的聚集，从而增加了醇脂质体的稳定性。但醇脂质体凝胶对人体皮肤的安全性、刺激性和有效性还有待进一步研究。

参考文献：

[1]吕蕙兰，温 情，王本杰，等.健康志愿者盐酸奥西布宁缓释制剂与普通制剂药代动力学及生物等效性研究[J].山东大学学报：医学版，2005，43（7）：657-660.

[2]温 清，贺 坤，郭瑞臣.盐酸奥昔布宁临床应用进展[J].中国药事，2004，18（7）：445-447.

[3]沈丹丹，张 涛，黄 华.盐酸奥昔布宁醇脂质体的制备及体外透皮吸收研究[J].中国药科大学学报，2011，42（1）：48-52.