妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中VEGF与MMP-9表达水平与子痫前期病情的相关性

赵　虎,张　凌,蔡一玲,赖　繁

(四川省成都市妇女儿童中心医院 妇产科,四川 成都,610091)



妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中VEGF与MMP-9表达水平与子痫前期病情的相关性

赵虎,张凌,蔡一玲,赖繁

(四川省成都市妇女儿童中心医院 妇产科,四川 成都,610091)

摘要:目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达及其与子痫前期发病的相关性。方法选取晚孕期正常孕妇53例(对照组)、轻度子痫前期患者61例(观察组Ⅰ)和重度子痫前期患者45例(观察组Ⅱ),比较3组VEGF、MMP-9的表达水平。结果对照组、观察组Ⅰ和观察组Ⅱ孕妇的胎盘组织中VEGF阳性表达率分别为86.79%、68.85%、40.00%,MMP-9阳性表达率分别为79.25%、67.21%、37.78%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论正常妊娠孕妇和子痫前期患者胎盘组织中均有VEGF及MMP-9表达，但是子痫前期患者VEGF及MMP-9表达水平均显著下降。子痫前期病情严重程度与VEGF及MMP-9表达水平有相关性。

关键词:子痫前期; 血管内皮生长因子; 基质金属蛋白酶-9; 妊娠期高血压疾病

妊娠期高血压属于妊娠期的一种特有疾病，其病因及发病机制尚不明确，常发生于妊娠20周以后，在分娩后迅速消失，其发病率为7～12%[1]。患者临床症状主要为尿蛋白、水肿、血液浓缩以及高血压等，甚至还有可能会发展成为子痫前期(PE)，导致孕产妇以及围生儿出现死亡情况[2]。血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)均对滋养细胞侵入具有重要的影响，是其侵入过程中的重要介导因素[3-4]。本文检测正常晚期妊娠妇女和子痫前期患者血清中VEGF及MMP-9表达水平，探讨其与子痫前期病情的相关性，现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料

选取本院2011年1月—2014年1月妇产科住院分娩的孕妇159例，年龄21～40岁，平均(30.6±3.7)岁，孕周35～42周，平均(38.0±2.5)周。其中正常妊娠孕妇53例作为对照组，年龄22～40岁，平均(31.2±3.6)岁，孕周35～41周，平均(37.4±2.7)周；轻度子痫前期患者61例作为观察组Ⅰ，年龄21～38岁，平均(30.1±3.8)岁，孕周36～42周，平均(38.2±2.6)周；重度子痫前期患者45例作为观察组Ⅱ,年龄23～40岁，平均(30.3±3.9)岁，孕周37～41周，平均(38.3±2.4)周。3组孕妇年龄、孕前体质量指数(BMI)、孕周、产次及基础疾病等方面的差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1试剂与设备:兔抗人MMP-9多克隆抗体(美国SANTA CRUZ公司),浓缩型鼠抗人VEGF单克隆抗体,SP-9000、DAB显色剂(北京中杉生物工程有限公司)。

1.2.2标本采集:所有孕产妇在分娩结束后，立即在胎盘中央(脐带附着部的对侧母体面)避开大血管和钙化点取2 cm×2 cm×2 cm胎盘组织，经产妇知情同意，生理盐水漂洗后置于福尔马林溶液中固定，常规石蜡包埋后切取4 μm切片行免疫组化分析。

1.2.3免疫组织化学SP法检测胎盘组织中VEGF和MMP-9的表达:以浓缩型鼠抗人VEGF单克隆抗体和兔抗人MMP-9多克隆抗体作为一抗，分别进行阴性对照。切片脱蜡入水，组织抗原微波修复后按照SP-9000免疫组织化学试剂盒说明书进行操作。经过DAB显色后显微镜下观察，细胞浆和/或细胞膜内呈现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。记录并统计阳性标本数目和阳性表达率。每次实验均应设阴性和阳性对照。

1.3统计学处理

本研究所得数据全部应用SPSS 21.0统计学软件进行统计学处理，计数资料实施χ2检验及百分比表示,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

VEGF在对照组、观察组Ⅰ和观察组Ⅱ孕妇的胎盘组织中均有表达。对照组、观察组Ⅰ和观察组Ⅱ孕妇VEGF阳性表达率分别为86.79%、68.85%和40.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在对照组、观察组Ⅰ和观察组Ⅱ孕妇的胎盘组织中均有表达。对照组、观察组Ⅰ和观察组Ⅱ孕妇MMP-9阳性表达率分别为79.25%、67.21%和37.78%,差异有统计学意义(P<0.05)。

3讨论

在子痫前期发病中，内皮细胞损伤是重要因素。在患者正常妊娠过程中，VEGF会对内皮细胞增生、分化、浸润以及迁移产生一定的促进作用，影响患者的血管系统生长和修复效果[5]。研究[6]发现，来源于胎盘的抑制血管生成分子sFlt-1一旦出现上升，也会对VEGF及VEGFR-2二者的结合产生抑制作用，降低VEGF生物活性。持续低水平VEGF能够有效延长内皮细胞功能及存活时间，但是子痫前期患者的临床sFlt-l增加则会导致VEGF浓度降低，从而无法达到维持血管生成的阈值，引发患者内皮细胞损伤，出现妊娠期高血压疾病。

妊娠成功的主要影响因素就是绒毛外滋养层细胞正常浸润子宫内膜，侵润的正常表现是在对子宫内膜基底膜和基质成分选择性降解。基质金属蛋白酶(MMP)是滋养细胞层在浸润、降解过程中分泌的一类与水解底物结合而发挥降解细胞外基质的蛋白水解酶。MMP-9是滋养细胞分泌的最有效的蛋白水解酶，其分泌量与血管重铸和滋养细胞侵袭能力密切相关。大量研究[7-9]表明，滋养细胞浸润子宫内膜能力下降可能与子痫前期的病情相关。本研究结果发现，子痫前期孕产妇和正常妊娠者相比,MMP-9表达水平明显偏低，并且其MMP-9表达水平随患者病情的不断进展而降低。

目前国内外关于VEGF和MMP-9与子痫前期病情严重程度关系的报道不多。多数研究只初步证实 VEGF和MMP-9在妊娠高血压疾病患者胎盘组织中表达下降，但其机制尚不清楚。Sandrim等[10-13]通过采用免疫组织化学法对正常妊娠及子痫前期患者的VEGF和MMP-9实施检测发现，两项指标在子痫前期患者胎盘中的表达水平明显偏低，分析其原因可能和患者滋养细胞浸润不足有一定相关性，以致患者发生胎盘的浅着床。曹征等[14-16]通过Western Bloting技术、RT-PCR及免疫组织化学法对不同孕产妇胎盘组织中的VEGF和MMP-9表达水平进行检测，结果显示子痫前期患者的阳性表达率明显偏低，分析其原因可能和子痫前期病情有关。研究表明[17-20]采用Western Bloting技术对非妊高征、妊高征孕妇孕期及正常未孕育龄妇女尿中VEGF和MMP-9表达水平进行检测，结果显示只有妊娠患者尿液中才能够成功检测到VEGF和MMP-9水平，同时尿中VEGF和MMP-9的检出率是妊高征患者较非妊高征患者低，提示VEGF和MMP-9低表达可能与妊高征相关。

综上所述,VEGF和MMP-9表达水平对妊娠高血压疾病发病及进展具有一定关系，且与子痫前期病情严重程度具有一定的关系。

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收稿日期:2015-12-06

基金项目:四川省卫生厅资助基金(sc20127648)

中图分类号:R 714.24

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2016)15-063-03

DOI:10.7619/jcmp.201615018

Relationship between VEGF and MMP-9 expression level and preeclampsia condition in the placenta tissue of pregnant patients with hypertension

ZHAO Hu,ZHANG Ling,CAI Yiling,LAI Fan

(Department of Obstetrics and Gynecology,Maternal and Children Central Hospital of Chengdu,Chengdu,Sichuan,610091)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the relationship between expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and Matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) and preeclampsia condition in the placenta tissue of pregnant patients with hypertensive disorder.MethodsA total of 53 normal pregnant women in late pregnancy(control group),61 cases with mild preeclampsia(observation group Ⅰ) and 45 cases with severe preeclampsia (observation groupⅡ) in our hospital were selected as research objects,VEGF and MMP-9 expression levels of three groups were detected.ResultsVEGF positive expression rate in the placenta tissue of the control group,observation group Ⅰ and observation group Ⅱ was 86.79%,68.85% and 40.00%,respectively.MMP-9 positive expression rate in the placenta tissue of pregnant women in the control group,observation group Ⅰ and observation group Ⅱ was 79.25%,67.21% and 37.78%,respectively.The results above revealed that the differences were statistically significant.ConclusionVEGF and MMP-9 both express in placenta tissue of normal pregnant women and the patients with preeclampsia,but the VEGF and MMP - 9 expression levels drop in the patients with preeclampsia.It suggests that there is a correlation between the disease severity of preeclampsia and the expression of the two factors.

KEYWORDS:preeclampsia; vascular endothelial growth factor; matrix metalloproteinases-9; gestational hypertension