灵芝化学成分的研究

陈　玉, 刘　流, 牛艳芬

(中南民族大学 化学与材料科学学院，武汉 430073)



灵芝化学成分的研究

陈玉, 刘流, 牛艳芬

(中南民族大学 化学与材料科学学院，武汉 430073)

摘要为研究灵芝的化学成分，利用溶剂提取法，对正、反相硅胶柱层析法和半制备高效液相色谱法对其进行了分离纯化，并根据理化性质和现代波谱技术进行了结构鉴定.结果表明：从灵芝乙醇提取物分离得到的10个化合物，分别鉴定为antiquol C (1)、ganoderic acid Y (2)、7-oxo-ganoderic acid Z3 (3)、7-oxo-ganoderic acid Z (4)、ganoderic acid B9 (5)、ganoderic acid C2 (6)、3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid (7)、ergosterol (8)、5α,8α-epidioxyergosta-6, 22-dien-3β-ol (9)、6, 9-epidioxy-ergosta-7,22-dien-3β-ol (10)，其中化合物(1)为首次从该属植物中分离得到.

关键词灵芝；化学成分；三萜；甾体

灵芝(Ganodermalucidum)为多孔菌科赤芝或紫芝的干燥子实体，别名有万年蕈、瑞草、秀草等，是我国一种传统的的大型药用真菌，属于担子菌纲(Basidiomycetes)多孔菌科(Polyporaceae)灵芝亚科(Ganodermatoideae)灵芝属(Ganoderma)[1].传统中医认为灵芝具有补肝益气、延年益寿的功效.近年来从灵芝中分离到三萜类化合物已有100种，其中三萜类化合物主要是高度氧化的羊毛甾烷衍生物[2].现代药理研究表明：灵芝三萜类化合物具有抗肿瘤、抗病毒等作用[3].为了进一步深入了解其有效成分，本文对灵芝的三萜和甾醇成分进行了系统的研究.

1材料与方法

1.1仪器与试剂

核磁共振波谱仪(Bruker AM-400型, 布鲁克公司)，高效液相色谱仪(Ultimate 3000半制备型, 美国戴安公司)，VWD，DAD检测器，半制备型色谱柱为5C18-MS-II (250 mm×10 mm, 5 μm).

灵芝购于云南西双版纳，由云南西双版纳傣族自治州民族医药研究所赵应红主任药师鉴定为灵芝属(Ganoderma)灵芝(G.Lucidum).50 μm反相材料ODS(日本YMC公司)；300～400目硅胶和硅胶H-TLC薄层预制板(青岛海洋化工厂)，硫酸香草醛显色剂(硫酸、香草醛、乙醇、水 分别为8 mL、0.5 g、10 mL、20 mL)，色谱甲醇(美国Tedia试剂公司)，其余试剂均为分析纯，由国药集团化学试剂有限公司和天津博迪化工有限公司生产.

1.2提取与分离

取灵芝粉碎后称重1.4 kg，用95%乙醇室温浸泡3次，每次24 h，合并3次提取液.真空抽滤得滤液，旋干浓缩，得提取物46.7 g.将此灵芝乙醇提取物经硅胶柱层析分离，用环己烷∶丙酮(50∶1→0∶1)梯度洗脱，TLC检测后合并相同组分，共收集7个组分(Fr.A～G).Fr.B经过正、反相硅胶柱色谱分离得到化合物8(200 mg)和9(20 mg).Fr.D经过反复的正、反相硅胶柱色谱分离得到化合物1(10 mg)、2(22 mg)、3(19 mg)和4(30 mg).Fr.E经过反复的正相硅胶柱色谱分离得到化合7(6 mg).Fr.F经过反复的正、反相硅胶柱色谱和半制备HPLC得到化合物5(12 mg)、6(4 mg)、10(9 mg)，其结构式见图1.

图1　化合物1～10的结构式Fig.1　Chemical structures of compound 1-10

2结果

2.1结构鉴定

化合物1：白色粉末，分子式为C30H48O,1H-NMR (400MHz, C5D5N)：δH5.61(1H, d,J=5.6 Hz, H-7), 5.44(1H, d,J=5.6 Hz, H-11), 5.27(1H, t,J=7.0 Hz, H-24), 3.51(1H, dd,J=8.4, 7.1 Hz, H-3), 1.71(3H, s, H-26), 1.66(3H, s, H-27), 1.24(3H, s, H-28), 1.16(3H, s, H-19), 1.12(3H, s, H-29), 1.02(3H, s, H-30),1.00(3H, d,J=5.2 Hz, H-21), 0.71(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[4]，故鉴定化合物1为antiquol C.

化合物2：白色粉末，分子式C30H46O3,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH5.61(1H, d,J=4.8 Hz, H-7), 5.44(1H, d,J=5.6 Hz, H-11), 5.23(1H, m, H-24), 3.50(1H, dd,J=8.6, 6.9 Hz, H-3), 2.15(3H, s, H-27), 1.25(3H, s, H-29), 1.17(3H, s, H-19), 1.13(3H, s, H-28), 1.03(3H, s, H-30), 1.00(3H, d,J=6.4Hz, H-21), 0.70(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[4]，故鉴定化合物2为ganoderic acid Y.

化合物3：白色粉末，分子式为C30H46O5,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH6.35(1H, m, H-24), 4.98(1H, d,J=5.6 Hz, H-15), 3.57(1H, dd,J=11.6, 4.4 Hz, H-3), 2.12(3H, s, H-27), 1.72(3H, s, H-19), 1.24(3H, s, H-29), 1.19(3H, s, H-18), 1.15(3H, s, H-28), 1.12(3H, s, H-30), 1.01(3H, d,J=5.2 Hz, H-21).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[5]，故鉴定化合物3为7-oxo-ganoderic acid Z3.

化合物4：白色粉末，分子式为C30H46O4,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH6.13(1H, m, H-24), 3.47(1H, dd,J=10.8, 6.0 Hz, H-3), 2.14(3H, s, H-27), 1.17(3H, s, H-19), 1.14(3H, s, H-29), 1.12(3H, s, H-28), 1.08(3H, s, H-30), 1.023H, d,J=6.0 Hz, H-21), 0.72(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[6]，故鉴定化合物4为7-oxo-ganoderic acid Z.

化合物5：白色粉末，分子式为C30H46O7.1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH4.92(1H, dd,J=8.8, 6.4 Hz, H-15), 4.86(1H, br d,J=6.4 Hz, H-7), 3.56(1H, dd,J=11.6, 4.8 Hz, H-3), 3.48(1H, dt,J=13.6,3.6 Hz, H-1), 3.34(1H, m, H-25), 3.15(1H, dd,J=17.6, 8.8 Hz, H-24), 3.01(1H, br d,J=17.6Hz, H-12), 2.64～2.58(1H,m, H-12), 2.64～2.58(1H, m, H-24), 2.39(1H, dd,J= 16.0, 9.6, H-22), 2.17～2.08(2H, m, H-16), 2.201H, m, H-20), 2.15(1H, m, H-6), 2.08～1.93(2H, m, H-2), 2.01(1H, m, H-5), 1.83(1H, m, H-6), 1.78(1H, m, H-17), 1.62(3H, s, H-30), 1.44(1H, m, H-1), 1.37(1H, d,J=7.2Hz, H-27), 1.35(3H, s, H-28), 1.30(3H, s, H-19), 1.14(3H, s, H-29), 0.99(3H, d,J=6.8 Hz, H-21), 0.97(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[7]，故鉴定化合物5为ganoderic acid B9.

化合物6：白色粉末，分子式为C30H46O7.1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH5.26(1H, br t,J=8.0 Hz, H-15), 4.99(1H, dd,J=10.0, 8.4 Hz, H-7), 3.54(1H, dd,J=11.2, 4.4 Hz, H-3), 3.31(1H, m, H-25), 3.13(1H, m, H-1), 3.09(1H, m, H-24), 3.02(1H, br d,J=15.2Hz, H-12), 2.70(1H,J=15.2Hz, H-12), 2.57(1H, m, H-22), 2.56(1H, m, H-24), 2.41(1H, m, H-6), 2.31(1H, m, H-22), 2.18(1H, m, H-20), 2.14～1.94(2H, m, H-16), 1.98(1H, m, H-6), 1.92(2H, m, H-2), 1.91(1H, m, H-17), 1.55(3H, s, H-18), 1.53(3H, s, H-28), 1.37(1H, d,J=6.8Hz, H-27), 1.29(3H, s, H-30), 1.19(1H, m, H-5), 1.15(1H, m, H-1), 1.12(3H, s, H-29), 0.98(3H, d,J=6.0 Hz, H-21).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[8]，故鉴定化合物6为ganoderic acid C2.

化合物7：白色粉末，分子式C30H42O7.1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH5.98(1H, s, H-16), 5.14(1H, dd,J=9.6, 8.4 Hz, H-7), 3.53(1H, dd,J=7.2, 4.8 Hz, H-3), 3.26(1H, m, H-1), 3.13(1H, m, H-12), 3.12(1H, m, H-24), 3.10(1H, m, H-20), 3.09(3H, d,J=7.2 Hz, H-27), 2.95(1H, dd,J=17.7, 4.4 Hz, H-22), 2.82(1H, dd,J=17.2, 6.4 Hz, H-22), 2.73(1H,J=16.0 Hz, H-12), 2.69(1H, m, H-25), 2.56(1H, dd,J=17.2, 4.4 Hz, H-24), 2.36(1H, dd,J=13.2, 7.6 Hz, H-6), 1.92(2H, m, H-2), 1.87(1H, m, H-6), 1.48(3H, s, H-18), 1.41(3H, s, H-19), 1.29(3H, s, H-28), 1.25(1H, m, H-1), 1.18(1H, m, H-5), 1.11(3H, s, H-29), 1.10(3H, d,J=7.2 Hz, H-21).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[9]，故鉴定化合物7为3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid.

化合物8：白色粉末，分子式C28H44O,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH5.73(1H, dd,J=6.4, 2.0 Hz, H-6), 5.52(1H, dd,J=5.6, 2.8 Hz, H-7), 5.29(1H, m, H-23), 5.25(1H, m, H-22), 3.97(1H, m, H-3), 1.11(3H, d,J=6.4 Hz, H-21), 1.06(3H, s, H-19), 1.00(3H, d,J=7.2 Hz, H-28), 0.90(3H, d,J=6.8 Hz, H-27), 0.89(3H, d,J=6.8 Hz, H-26), 0.69(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[10]，故鉴定化合物8为ergosterol.

化合物9：针状结晶(甲醇)，分子式为C28H46O3,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH6.55(1H, d,J=8.4 Hz, H-6), 6.35(1H, d,J=8.4 Hz, H-7), 5.31(1H, m, H-23), 5.22(1H, m, H-22), 4.43(1H, m, H-3), 1.05(3H, d,J=6.4 Hz, H-21), 0.98(3H, d,J=6.8 Hz, H-28), 0.91(3H, s, H-19), 0.89(3H, d,J=6.8 Hz, H-27), 0.88(3H, d,J=6.8 Hz, H-26), 0.79(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[11]，故鉴定化合物9为5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol.

化合物10：白色粉末，分子式为C28H44O2,1H-NMR(400MHz, C5D5N)：δH6.36(1H, d,J=5.6 Hz, H-7), 6.10(1H, d,J=4.8 Hz, H-23), 5.77(1H, m, H-22), 4.87(1H, m, H-6), 4.35(1H, m, H-3), 1.56(3H, s, H-19), 1.08(3H, d,J=6.8 Hz, H-21), 0.97(3H, d,J=6.8 Hz, H-28), 0.88(3H, d,J=6.4 Hz, H-27), 0.87(3H, d,J=6.8 Hz, H-26), 0.67(3H, s, H-18).13C-NMR(100 MHz, C5D5N)数据见表1.以上数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物10为6,9-epidioxy-ergosta-7,22-dien-3β-ol.

表1　化合物1～10的13C-NMR数据

3结语

通过对灵芝的系统分离，得到10种化合物，分别鉴定为antiquol C(1)、ganoderic acid Y(2)、7-oxo-ganoderic acid Z3(3)、7-oxo-ganoderic acid Z(4)、ganoderic acid B9(5)、ganoderic acid C2(6)、3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(7)、ergosterol(8)、5α, 8α-epidioxyergosta-6, 22-dien-3β-ol(9)、6, 9-epidioxy-ergosta-7,22-dien-3β-ol(10)，其中化合物1为首次从该属植物中分离得到，为进一步研究和开发该药物提供了实验基础和理论依据.

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Chemical Constituents ofGanodermalucidum

ChenYu,LiuLiu，NiuYanfen

(College of Chemistry and Materials Science，South-Central University for Nationalities， Wuhan 430074，China)

AbstractTo study the chemical constituents ofGanodermalucidum, the constituents were isolated and purified by the silica gel column chromatography, ODS and semi-preparative HPLC.Their structures were elucidated on the basis of chemical and spectroscopic analysis. Ten compounds were isolated fromG.lucidumand identified as: antiquol C (1), ganoderic acid Y (2), 7-oxo-ganoderic acid Z3 (3), 7-oxo-ganoderic acid Z (4), ganoderic acid B9 (5), ganoderic acid C2 (6), 3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid (7), ergosterol (8), 5α,8α-epidioxyergosta-6, 22-dien-3β-ol (9), 6,9-epidioxy-ergosta-7,22-dien-3β-ol (10), among them compound 1 was isolated from the genusGanodermafor the first time.

KeywordsGanodermalucidum; chemical constituents; triterpenoids; steroids

收稿日期2015-09-23

作者简介陈玉(1970-),女,副教授,博士,研究方向:天然药物化学, E-mail: chenyuwh888@126.com

基金项目国家自然科学基金资助项目(31370379)

中图分类号R914.4

文献标识码A

文章编号1672-4321(2016)02-0010-05