单囊胚移植在新鲜移植周期与冻融移植周期中的应用比较

王伟周，徐继强，李敏，沈玉良，魏德莉，商微

海军总医院 辅助生殖中心，北京 100048

单囊胚移植在新鲜移植周期与冻融移植周期中的应用比较

王伟周，徐继强，李敏，沈玉良，魏德莉，商微

海军总医院 辅助生殖中心，北京 100048

目的：探讨新鲜移植与冻融移植对单囊胚移植妊娠结果的影响。方法：回顾性分析2013～2015年在海军总医院行单囊胚移植的324例患者，其中新鲜移植组周期数为133例、冻融移植组周期数为191例，比较2组患者基本条件、临床妊娠率、流产率、分娩率等指标。结果：新鲜移植组和冻融移植组的患者基本条件中，除了囊胚级别（1.6± 0.5 vs 1.9±0.4）、D5囊胚比例（100%vs 94.27%）、获卵数（17.5±5.2 vs 21.6±9.9）有显著性差异外（P＜0.01），其余无显著性差异（P＞0.05）；新鲜周期移植组临床妊娠率低于冻融移植组（51.13%vs 62.30%），具有显著性差异（P＜0.05）；流产率（17.65%vs 19.33%）、分娩率（42.10%vs 49.21%）无统计学差异（P＞0.05）。结论：冻融移植周期中单囊胚移植可取得比新鲜移植周期更高的临床妊娠率。

单囊胚移植；新鲜移植周期；冻融移植周期；妊娠率

随着胚胎体外培养技术的进步，人类胚胎已经可以在体外环境下培养至囊胚期，将体外培养得到的囊胚移植入病人子宫后可以得到成功的临床妊娠[1]。相对于卵裂期胚胎移植，囊胚移植可以得到更高的临床妊娠率和分娩率[2]，囊胚培养和移植在辅助生殖中的应用越来越广泛。但在囊胚移植的高妊娠率的同时，伴随着较高的多胎率，如何保持较理想妊娠率的同时降低多胎率，单囊胚移植成为可能解决此问题的较理想选择[3]。冻融胚胎移植技术能够避免多余胚胎浪费，增加累计妊娠率，减少卵巢过度刺激症的发生，与单胚胎移植相结合能降低多胎妊娠率[4]，已经成为辅助生殖中的常规应用技术。本研究就单囊胚移植在新鲜移植周期和冻融移植周期中的应用进行回顾性分析，为单囊胚移植策略的决定提供依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2013～2015年在本中心接受体外受精/卵胞浆内单精子显微注射（IVF/ICSI）治疗，年龄≤35周岁并行单囊胚移植的患者。根据移植周期的不同分为新鲜移植组与冻融移植组。新鲜移植组均为第一次取卵且第一次移植，冻融移植组均为第一次取卵且第一次冻融胚胎移植；所有囊胚均非胚胎植入前遗传学筛查或诊断来源；所移植囊胚均为3期及以上囊胚。

1.2 胚胎培养及囊胚评分

胚胎培养及评分标准参考悉尼IVF中心[5]：受精后，D1胚胎在Cook卵裂期培养液中培养直至D3；在D3的早晨，绝大部分胚胎移入Cook囊胚期培养液中培养至D6。所有胚胎均在37℃，5% O2、6%CO2、89%N2的气体环境培养箱中培养。

当胚胎培养培养至D5或D6时，对囊胚进行评分：根据囊腔扩张程度进行分期，囊胚小于胚胎体积的50%为1期，超过50%为2期，占满整个胚胎为3期，囊胚扩张、透明带变薄为4期，囊胚开始从透明带里孵出为5期，囊胚完全从透明带孵出为6期。对处于3～6期的囊胚内细胞团和滋养层外胚层进行评分：①内细胞团评分，细胞数量多且分布紧密为A，细胞数量较少且分布松散为B，细胞数量极少为C；②滋养外胚层评分，较多的细胞形成连接紧密的上皮层为A，较少的细胞连接松散为B，细胞少且体积大为C。以A为高、B为中、C为低。

1.3 胚胎冷冻及解冻

本中心囊胚冷冻标准：D5评分达3BC或3CB及以上的进行冷冻，若未达以上标准则继续培养至D6，再按照以上标准冷冻。当患者无符合3BC以上标准的囊胚时，与主管医生沟通，主管医生告知患者并征得患者同意后对次级囊胚进行冷冻。

冷冻方法：囊胚冷冻前，利用激光破膜系统（Hamilton ZILOS-tk）进行人工皱缩，待囊胚皱缩后，将囊胚放入ES中6 min左右，然后将其在VS中快速清洗几次，放于冷冻载杆上，快速放入液氮中冷冻。

解冻方法：囊胚于移植前一天下午解冻。解冻时，将冷冻载杆从液氮中取出，快速放置于37℃ WS1中约1 min，将其依次放入WS2中3 min、WS3中6 min，之后放入Cook囊胚培养液中培养过夜，移植前对解冻后囊胚存活情况进行评估，囊胚完全扩张或未扩张但50%以上细胞存活即判定为胚胎存活。

1.4 胚胎移植

新鲜周期促排卵方案为长方案或微刺激，囊胚移植在取卵日后第5 d上午选择评级最好的囊胚进行移植。

冻融周期内膜准备参照本中心方案[6]，主要为自然周期、人工周期和促排卵周期三种。自然周期和促排卵周期在排卵日后第5 d进行冻融囊胚移植，人工周期在使用黄体酮后第5 d进行冻融囊胚移植。

1.5 妊娠判定

自移植日始12 d采血测β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG），阳性者定义为生化妊娠；移植后4～5周进行超声波检查，有孕囊及原始心管搏动即为临床妊娠。

1.6 统计方法

采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。组间均数的比较采用t检验或曼-惠特尼U检验，组间率的比较采用卡方检验或费舍尔精确检验。P＜0.05表示结果具有统计显著性。

2 结果

2.1 2组基本条件比较

新鲜移植组133例，冻融移植组191例。如表1所示，体重指数、年龄、原发患者比例、不孕年限在2组间的比较结果均无统计学差异（P＞0.05）；冻融移植组移植的胚胎平均等级低于新鲜移植组，结果具有统计学显著性（P＜0.01）；冻融移植组移植的D5囊胚比例低于新鲜移植组，结果具有统计学显著性（P＜0.01）；冻融移植组的获卵数高于新鲜移植组，结果具有统计学显著性（P＜0.01）。

2.2 妊娠结果比较

如表2所示，冻融移植组临床妊娠率高于新鲜移植组，结果具有统计学差异（P＜0.05），其余指标在2组间比较结果均无统计学差异。

表1 2组基本条件比较

表2 妊娠结局比较

3 讨论

本研究选取的病人年龄≤35周岁,且全部为第一次取卵，新鲜移植组为第一次移植，冻融周期组为第一次冻融胚胎移植，避免了高龄患者及反复失败患者对结果产生的影响。

胚胎移植后临床妊娠率与胚胎级别相关，相同条件下，级别越高的胚胎，移植后妊娠率会越高。同时，有研究表明D6冻融囊胚移植后临床妊娠结果低于D5冻融囊胚[7]，提示D5囊胚质量优于D6。然而，本研究却出现不同的结果。冻融移植组的囊胚级别低于新鲜移植组，但冻融囊胚移植后妊娠率反而高于新鲜组。新鲜移植组中所移植的囊胚均为D5囊胚；冻融移植组所移植的囊胚有94.27%为D5囊胚，其余为D6囊胚。造成以上结果的原因，推测可能是内膜容受性方面的不同。

在辅助生殖技术中，胚胎植入的成功不仅需要高质量的胚胎，胚胎与子宫内膜之间的相互作用及子宫内膜的容受性都起着重要作用[8]。控制性超促排卵（controlled ovarian hyperstimulation，COH）过程中，大量外源性促性腺激素被用来刺激卵泡生长以便获得足够使用的卵子，由此产生的高于生理水平的雌激素与孕酮可能影响子宫内膜的正常生理变化。胞饮突作为子宫内膜容受性的重要标志，其在COH后会提前出现，导致子宫内膜种植窗的提前开放和关闭，造成子宫内膜与胚胎植入的不同步[9]；雌激素与孕激素受体表达的降低在COH后也会提前，提示子宫内膜植入窗口出现时间的异常[10]；基因表达谱的分析研究同样证明COH对子宫内膜容受性相关基因的表达产生了显著影响[11]。冻融胚胎移植能避免新鲜周期移植所面临的这些问题。与传统的慢速冷冻技术相比，目前胚胎的玻璃化冷冻技术可以更好地保存卵子、卵裂期胚胎或囊胚，随着玻璃化冷冻技术的发展，胚胎冷冻保存及复苏对胚胎移植结果的影响会越来越小[12]。基于上述原因，冻融单囊胚移植可能会取得与新鲜单囊胚移植相当或更高的妊娠结果。本研究结果表明冻融周期单囊胚移植临床妊娠率高于新鲜周期单囊胚移植，虽然2组间分娩率比较结果无统计学差异，但其具有与临床妊娠率一致的变化趋势。

同时，冻融移植组的获卵数要高于新鲜移植组。提示，获卵数高时选择将胚胎进行全部冷冻保存，然后调整好内膜后择期进行冻融胚胎移植，可能会取得更好的效果。进一步分析新鲜移植组中获卵数与妊娠率的关系，发现获卵数多时妊娠率反而下降（相关数据未列出）。提示当新鲜周期获卵数多时可选择进行冻融胚胎移植，这样既有助于避免卵巢过度刺激症（ovarian hyper⁃stimulation syndrome，OHSS）的发生，减轻患者的负担，还可以提高单次移植临床妊娠率。

综上所述，与新鲜周期单囊胚移植相比，冻融单囊胚移植可以取得更高的临床妊娠率，且没有增加多胎妊娠率和异位妊娠率。当获卵数多时，为了避免OHSS的发生，选择冻融周期单囊胚移植植策略是可以成为首选。

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Comparison of Single Blastocyst Trasnsfer in theFresh and Frozen Cycles

WANG Wei-Zhou,XU Ji-Qiang,LI Min,SHEN Yu-Liang,WEI De-Li,SHANG Wei*
Assisted Reproductive Center,Navy General Hospital,Beijing 100048,China

Objective:To investigate the effects of fresh transplantation and freeze-thaw transplantation on the outcome of single-embryo transfer.Methods:A retrospective study was conducted on 324 patients who underwent single blastocyst transfer from 2013 to 2015 in the Navy General Hospital.The number of cycles in the fresh group was 133 and the number of cycles in the frozen group was 191.The basic condition,clinical pregnancy rate,miscarriage rate and delivery rate were compared between the two groups.Results:Among the patient basic conditions,blastocyst quality（1.6±0.5 vs 1.9±0.4）,the ratio of D5 blastocyst（100%vs 94.27%）,oocyte numbers（17.5±5.2 vs 21.6±9.9）were significantly different,the rest were no significantly different.The clinical pregnancy rate of fresh transfer cycle was significant lower than frozen transfer cycle（51.13%vs 62.30%）.However,the mis⁃carriage rate（17.65%vs 19.33%）and delivery rate（42.10%vs 49.21%）were no different.Conclusion:Compared with fresh transfer,single-blastocyst transferred in frozen transfer has a significantly greater chance to implant.

single blastocyst transfer;fresh transfer cycle;forzen transfer cycle;pregnancy rate

R714

A

1009-0002（2017）02-0145-04

10.3969/j.issn.1009-0002.2017.02.016

2017-01-13

王伟周（1981-），男，硕士研究生

商微，（E-mail）shang.wei@163.com

*Corresponding anthor,E-mail:shang.wei@163.com